Библиографическое описание:

Тищенко А. С., Терехов В. И., Мартыненко Я. Н. Влияние минерального и масляного адъювантов на иммуногенность комплексного эшерихиозного анатоксина [Текст] // Инновационные технологии в сельском хозяйстве: материалы III Междунар. науч. конф. (г. Казань, май 2017 г.). — Казань: Бук, 2017. — С. 34-40. — URL https://moluch.ru/conf/agr/archive/249/12341/ (дата обращения: 14.12.2017).



Данная статья посвящена изучению иммуногенных свойств комплексного эшерихиозного анатоксина при совместном его применении с адъювантами. Результаты исследования показали, что при использовании минерального и масляного адъювантов иммуногенность эшерихиозного анатоксина повышается, что выражается активной выработкой специфических антител и продолжительностью их циркуляции в организме.

Ключевые слова: эшерихиозный анатоксин, масляный адъювант, гидрат окиси алюминия, вакцинация, антитоксические антитела

В основе эффективного развития сельского хозяйства и отраслей животноводства лежит благополучие животных в отношении инфекционных заболеваний, среди которых немаловажная роль принадлежит эшерихиозу [4, 10].

В последнее время специфическая профилактика эшерихиоза сельскохозяйственных животных приобретает всю большую актуальность. Прежде всего, это связано с тем, что кишечная палочка помимо большого количества серологических вариантов имеет достаточно широкий патогенный потенциал, который дает ей возможность для реализации своих болезнетворных функций в отношении макроорганизма [4, 6]. Следовательно, для достижения цели эффективной иммунизации эшерихиоза, современный вакцинный препарат должен учитывать как антигенный состав, так и весь спектр основных факторов патогенности возбудителя заболевания [7].

На сегодняшний день установлено, что одним из ведущих патогенных свойств Escherichia coli (E. coli), который обуславливает тяжело протекающие энтеротоксемические формы эшерихиоза, является их способность продуцировать экзотоксины [1, 6, 10]. В связи с этим, разработка и совершенствование биологических препаратов, в состав которых входят инактивированные формалином токсины кишечной палочки, представляется перспективным направлением специфической профилактики эшерихиоза животных [2, 7, 8, 11].

Цель исследования

Целью данного исследования являлось изучение в сравнительном аспекте иммуногенных свойств комплексного эшерихиозного анатоксина при совместном его применении с минеральным и масляным адъювантом.

Материалы иметоды

Иммунизацию подопытных животных осуществляли эшерихиозным анатоксином (ЭА), содержащим в своем составе комплексный токсоидный компонент инактивированных формалином термостабильного, термолабильного и шигаподобного экзотоксинов E. coli [5].

В качестве минерального адъюванта использовали гидрат окиси алюминия коллоидный в 20 %-ной концентрации (ГОА). Масляный адъювант представлял собой сочетание минерального масла марки «Маркол-52» с эмульгатором Монтанид (МА), который использовали в 50 %-ной концентрации. Данные адъюванты широко известны, описаны в научных литературных источниках и применяются при конструировании вакцинных биопрепаратов [3, 9].

В качестве биологической модели для проведения опыта использовали белых крыс, массой 180–200 грамм, из которых по методу пар-аналогов сформировали 4 группы по 10 животных в каждой. Вакцинацию животных проводили двукратно с интервалом 7 дней подкожно в дозе 0,15 см3. Крыс 1-й группы вакцинировали нативным анатоксином; 2-й группе животных вводили ЭА с добавлением 20 % гидрата окиси алюминия; крыс 3-й группы вакцинировали ЭА с масляным адъювантом; 4-я группа являлась контрольной, животным этой группе препараты не вводили.

Для определения поствакцинального иммунитета у подопытных животных на 7, 14, 21, 28 и 35 сутки после последнего введения препаратов отбирали сыворотку крови и подвергали ее исследованию на наличие специфических антитоксических антител реакцией непрямой гемагглютинации в эритроцитарном антигенном диагностикуме. У крыс из контрольной группы кровь отбирали однократно для определения возможных фоновых антител к токсинам кишечной палочки.

Результаты исследований

Результаты проведенного исследования показали (табл. 1), что через 7 дней после последнего введения препаратов у тех крыс, которым ввели ЭА без адъювантов, титр антител составлял 1:38,4, в то время как у животных, которым ЭА вводили с адъювантами, он был выше: в группе № 2  1:44,8, в группе № 3  1:54,4. У крыс из 4-й контрольной группы специфических антител к токсинами кишечной палочки не выявлено.

Таблица 1

Титр специфических антитоксических антител всыворотке крови крыс после иммунизации

Группа животных ипрепарат

Количество антител по дням после вакцинации

7

14

21

28

35

1 (ЭА)

1:38,4

1:22,4

1:11,2

1:8,8

1:5,2

2 (ЭА+ГОА)

1:44,8

1:83,2

1:70,4

1:41,6

1:17,6

2 (ЭА+ МА)

1:54,4

1:57,6

1:89,6

1:102,4

1:76,8

3 (отрицательный контроль)

-

-

-

-

-

На 14-й день исследования у крыс, которым ЭА вводили без адъюванта, наблюдали снижение титра антител — 1:22,4, а у животных из 2-й группы напротив, произошло практически двукратное увеличение титра антител по сравнению с первоначальным значением и достигло своих максимальных значений — 1:83,2 (рис. 1). В группе № 3 динамика увеличения количества антител была незначительной и составила 1:57,6.

Рис. 1. Динамика накопления титров специфических антител в сыворотке крови у крыс

На 21-й день исследования у крыс из первой и второй опытных групп продолжилась тенденция к снижению количества антител, данные показатели составили соответственно 1:11,2 и 1:70,4. В группе животных, где анатоксин применяли с масляным адъювантом, титр антител увеличился в 1,5 раза по сравнению с предыдущим значением и был самым высоким в опытных группах (1:89,6) (рис. 1).

На 28-й и 35-й дни исследований у животных из 1-й группы, где анатоксин применяли без адъюванта, количество антител понизилось еще в 1,3 -2,2 раза и составило к концу опыта 1:5,2. В группе животных, которым ЭА вводили с ГОА, титр антител на 28-й день понизился до 1:41,6, а к 35-му дню составил 1:17,6. В свою очередь у крыс из третьей группы количество антител продолжало увеличиваться и достигло своего максимума  1:102,4 (рис. 1), после чего данный показатель стал снижаться и к концу опыта составил 1:76,8.

Выводы

Таким образом, проведенные исследования позволяют сделать соответствующие выводы:

  1. Применение адъювантов благоприятно сказывается на иммуногенных свойствах комплексного эшерихиозного анатоксина, что выражается повышением продукции специфических антител в ответ на введение препаратов.
  2. Иммуногенность эшерихиозного анатоксина зависит от вида адъюванта, что подтверждается различной продолжительностью циркуляции и накопления антител в организме вакцинированных животных.
  3. При сравнении иммуногенных свойств анатоксина в сочетании с различными адъювантами установили, что при использовании ЭА с ГОА максимальный титр антитоксических антител приходится на 14-й день исследований, который в последующем понижается. Применение эшерихиозного анатоксин с масляным адъювантом, напротив, стимулировал у животных постепенное накопление антител, максимум которых достигло на 28 сутки исследований.

Литература:

  1. Емельяненко П. А. Энтеротоксины кишечных бактерий / П. А. Емельяненко // Ветеринария.  2000. — № 2. — С. 25–27.
  2. Караев Я. М. Иммуногенные и протективные свойства эшерихиозного анатоксина / Я. М. Караев // Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук. — Краснодар, 2009.
  3. Петров Р. В. Хаитов Р. М. Искусственные антигены и вакцины.  М.: Медицина, 1988.  304 с.
  4. Терехов В. И. Патогенный потенциал энтеробактерий, выделенных от новорожденных телят при острых кишечных заболеваниях / В. И. Терехов, Т. В. Малышева, А. С. Тищенко, Н. С. Мусатова // Ветеринария Кубани.  2017. — № 2. — С. 11–13.
  5. Терехов В. И. Способ получения эшерихиозного анатоксина / В. И. Терехов, Я. М. Караев, А. С. Тищенко, А. В. Иванов, П. В. Крамарь // Патент на изобретение RUS 2432174 27.07.2010.
  6. Терехов В. И. Факторы адгезии и колициногенная активность Escherichia coli / В. И. Терехов, А. С. Тищенко, И. В. Сердюченко // Вестник ветеринарии.  2015.  № 3 (74).  С. 41–45.
  7. Тищенко А. С. Влияние адъювантов на иммуногенные свойства эшерихиозного анатоксина: автореф. дисс. на соискание ученой степени канд. вет. наук: 06.02.02.  Краснодар, 2011. — 25 с.
  8. Тищенко А. С. Влияние различных адъювантов на свойства эшерихиозного анатоксина, изменяющие функциональную активность нейтрофильных гранулоцитов / А. С. Тищенко, В. И. Терехов // Ветеринария Кубани.  2010.  № 6.  С. 11–13.
  9. Aucouturier J. Adjuvants designed for veterinary and human vaccines / J. Aucouturier, L. Dupuis, V. Ganne // Vaccine, 2001. — № 19.  P. 2666–2672.
  10. Dubreuil J. D. Animal enterotoxigenic Escherichia Coli / J. D. Dubreuil, R. E. Isaacson, D. M. Schifferli // EcoSal Plus.  2016.  Oct; 7(1): doi: 10.1128/ecosalplus.ESP-0006–2016.
  11. Zhang W. Progress and challenges in vaccine development against enterotoxigenic Esche-richia coli (ETEC)-associated porcine post-weaning diarrhea (PWD) / W. Zhang// J. Vet. Med. Res.  2014.  1 (2).  P. 1006–1019.
Основные термины (генерируются автоматически): эшерихиозного анатоксина, специфических антител, комплексного эшерихиозного анатоксина, титр антител, антитоксических антител, специфических антитоксических антител, масляным адъювантом, количества антител, количество антител, титра антител, escherichia coli, выработкой специфических антител, группе животных, свойств комплексного эшерихиозного, группы специфических антител, титров специфических антител, кишечной палочки, антитоксических антител реакцией, продукции специфических антител, иммуногенных свойств комплексного.

Ключевые слова

вакцинация, эшерихиозный анатоксин, антитоксические антитела, масляный адъювант, гидрат окиси алюминия

Обсуждение

Социальные комментарии Cackle
Задать вопрос