Библиографическое описание:

Тищенко А. С., Терехов В. И., Сиренко В. В., Винокурова Д. П. Влияние бактериального полисахарида и полиэлектролита на иммуногенные свойства эшерихиозного анатоксина // Молодой ученый. — 2016. — №20. — С. 113-117.



Исследования показали, что использование пирогенала и полиакриловой кислоты в качестве адъювантов в должной мере повышают иммуногенность эшерихиозного анатоксина, выражающуюся более активной выработкой антитоксических антител. Установлено, что наиболее выраженные адъювантные свойства при использовании с анатоксином были отмечены у пирогенала при двукратной иммунизации в дозе 1 мл.

Ключевые слова: эшерихиозный анатоксин, адъюванты, пирогенал, полиакриловая кислота, иммунизация, кролики, антитоксические антитела

В условиях интенсификации производства основными задачами сельского хозяйства являются обеспечение сохранности животных и недопущение возникновения у них различных заболеваний массового характера [1, 8]. В свою очередь колибактериоз (эшерихиоз) по-прежнему остается актуальной проблемой для животноводства страны и наносит огромный экономический ущерб [9, 12]. Это связано прежде всего с тем, что современные вакцины по своему антигенному составу не всегда способны обеспечить надежную защиту в отношении эшерихиоза. Кишечная палочка обладает широким набором факторов патогенности, основными из которых является наличие специфических адгезинов (фимбрии, пили), а также токсигенные свойства [3, 11]. Учитывая данное обстоятельство, в последние годы в ветеринарной практике для профилактики эшерихиоза используют в основном вакцины на основе соматических, пилевых антигенов, а также поликомпонентные вакцины с обязательным включением инактивированных форм экзотоксинов Escherichia coli (E. coli) [2, 13].

Между тем исследованиями ряда авторов установлено, что основная этиологическая роль в эшерихиозе животных принадлежит энтеротоксигенным и энтерогемморагическим E. coli, продуцирующие термолабильный (LT), термостабильный (ST) и шигаподобный (STX 1 и 2) токсины [7, 10]. Поэтому при разработке вакцинных препаратов для профилактики эшерихиоза, необходимо ориентироваться на создание и внедрение в практику анатоксинов из токсигенных вариантов E. coli [2, 6]. Но поскольку инактивированные токсины кишечной палочки обладают низкой иммуногенной активностью, необходимо использование веществ усиливающих иммунный ответ — адъювантов [6, 13].

Цель исследования

Целью данной работы являлось изучение влияния бактериального полисахарида и полиэлектролита в качестве адъювантов на иммуногенные свойства эшерихиозного анатоксина при иммунизации кроликов.

Материалы иметоды

Вакцинацию животных опытных групп осуществляли поликомпонентным эшерихиозным анатоксином (ЭА), содержащим инактивированные токсины (TL, TS, STX) E. coli [4] с добавлением адъювантов.

В качестве бактериального полисахарида использовали пирогенал (липополисахарид (ЛПС) грамотрицательных бактерий) в концентрации 100 мкг/мл, в качестве полиэлектролита — полиакриловую кислоту (ПАК) в 0,3 %-ной концентрации.

Для проведения опыта использовали 18 кроликов породы советская шиншилла, из которых сформировали 6 групп животных по 3 животных в каждой. Кроликов иммунизировали двукратно с интервалом 7 дней. Животным 1-й группы инъецировали анатоксин с ЛПС в дозе 0,5 мл; 2-й группы — ЭА с ЛПС в дозе 1 мл; 3-й группы — ЭА с ПАК в дозе 0,5 мл; 4-й группы — ЭА с ПАК в дозе 1 мл. Животных 5-й и 6-й групп иммунизировали анатоксином без адъювантов в дозах 0,5 и 1 мл соответственно. Все кролики содержались в одинаковых условиях. За опытными животными вели клинические наблюдения, учитывая общую и местную реакцию на введение препаратов.

На 7, 14 и 21 день после последней инъекции препаратов отбирали кровь для определения наличия антитоксических антител. Кровь брали из наружной краевой вены уха в пробирки VENOJECT® II (Бельгия) с гелем.

Антитоксические антитела определяли в реакции непрямой гемагглютинации с помощью разработанного эритроцитарного диагностикума [5].

Результаты исследований

Наблюдения показали, что у вакцинированных животных заметных изменений общего состояния не было. Температура тела оставалась в пределах физиологической нормы. На месте инъекции припухлостей, уплотнений, болезненности и повышения местной температуры не установлено.

Результаты исследований сыворотки крови показали (табл. 1), что через 7 дней после 1-й вакцинации у кроликов во всех опытных группах идет активная выработка антитоксических антител, однако интенсивность их накопления различается.

Из материалов таблицы видно, что через 7 дней после 1-й вакцинации в группах у кроликов, которым вводили эшерихиозный анатоксин без адъювантов, идет выработка антитоксических антител, однако количество их незначительно.

Таблица 1

Динамика антителообразования укроликов после иммунизации ЭА всочетании садъювантами

Группа иадъювант

Доза препарата, мл

Титр антитоксических антител,log2

На 7-й день после первой вакцинации

На 7-й день после второй вакцинации

На 14-й день после второй вакцинации

На 21-й день после второй вакцинации

1 (ЛПС)

0,5+0,5

3,6±0,5

4,6±0,5

4,3±0,5

3,3±0,5

2 (ЛПС)

1+1

3,3±0,5

5±0,8

4,6±0,5

3,6±0,5

3 (ПАК)

0,5+0,5

2,3±0,5

3,6±0,5

3,3±0,5

2,3±0,5

4 (ПАК)

1+1

2,6±0,5

4,3±0,5

3,6±0,5

2,6±0,5

5 (ЭА)

0,5+0,5

1,3±0,5

2,6±0,5

2,3±0,5

0,6±0,4

6 (ЭА)

1+1

0,6±0,4

3,3±0,5

2,6±0,5

1,3±0,5

Между тем, введение в анатоксин адъювантов способствовало более выраженному иммунному ответу, чем в группах, где анатоксин применяли без адъювантов. Так титр антител из групп 1–4 находился в пределах 2,3±0,5–3,6±0,5 log2, а у животных из 5–6 групп — 1,3±0,5–0,6±0,4 log2.

После второй вакцинации антителообразование у кроликов во всех опытных группах происходило более интенсивно. Так в группах, где анатоксин применяли с адъювантами, титр антител был в пределах 5±0,8–3,6±0,5 log2, а в группах без адъювантов — 3,3±0,5–2,6±0,5 log2. Также было отмечено, что на динамику антителообразования непосредственным образом влияют вид адъюванта и используемая схема иммунизации. При двукратной иммунизации ЭА с ЛПС в дозе 1 мл, иммунный ответ был более выраженным, чем при иммунизации анатоксином с ЛПС в дозе 0,5 мл и при иммунизации ЭА с ПАК.

На 14-й день после второй вакцинации у животных всех групп произошло незначительное снижение титра антитоксических антител (рис. 1). При этом в группах животных, где анатоксин применяли с адъювантами, уровень антител был в 2–4 раза выше, чем в группах, где адъюванты не применялись.

Рис. 1. Динамика титров антитоксических антител в сыворотке крови у кроликов

На 21-й день после иммунизации произошло равномерное двукратное снижение количества антитоксических антител в сыворотке крови, при этом в группах 1–4 данный показатель находился в пределах 3,6±0,5–2,3±0,5 log2, а в 5-й и 6-й группах — 1,3±0,5 log2 и 0,6±0,4 log2 соответственно.

Выводы

Таким образом, в результате данного опыта нами было установлено, что адъюванты в должной мере повышают иммуногенность ЭА, что проявилось более активной выработкой антитоксических антител. При этом двукратное введение ЭА с адъювантами в лучшей мере стимулирует антителообразование, чем однократная иммунизация. Наиболее выраженные адъювантные свойства при использовании с ЭА были отмечены у пирогенала при двукратной иммунизации в дозе 1 мл.

Литература:

  1. Винокурова, Д. П. Распространение и патоморфология дирофиляриоза у собак и кошек в Краснодарском крае и морфология дирофилярий: автореф. дис. кан. вет. наук / Д. П. Винокурова. — Ставрополь, 2011–20 с.
  2. Караев, Я. М. Иммуногенные и протективные свойства эшерихиозного анатоксина / Я. М. Караев // Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук. — Краснодар, 2009. — 132 с.
  3. Куликовский, А. В. Токсигенные эшерихии — актуальная проблема ветеринарии и медицины / А. В. Куликовский, А. Н. Панин, В. В. Соснина //Ветеринария, 1997. –№ 3. — С.25–27.
  4. Пат. 2432174, Российская Федерация, МПК А61К 39/108. Способ получения эшерихиозного анатоксина / В. И. Терехов, Я. М. Караев, А. С. Тищенко, А. В. Иванов, П. В. Крамарь; заявитель и патентообладатель ФГУ ВПО Кубанский государственный аграрный университет. — № 2010131645/15; заявл. 27.07.2010; опубл. 27.10.2011, бюл. № 30. — 5 с.
  5. Пат 2449290 Российская Федерация, МПК G01N 33/556. Способ получения эритроцитарного диагностикума / Терехов В. И., Караев Я. М., Иванов А. В.; заявитель и патентообладатель ФГУ ВПО Кубанский государственный аграрный университет. — № 2009129696/15; заявл. 03.08.2009; опубл. 27.04.2012, бюл. № 12. — 6 с.
  6. Петров, Р. В. Искусственные антигены и вакцины / Р. В. Петров, Р. М. Хаитов / — М.: Медицина, 1988. — 304 с.
  7. Ратинер, Ю. А. Энтерогеморрагические кишечные палочки и вызываемые ими заболевания / Ю. А. Ратинер, В. М. Бондаренко, A. Sitonen // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунологии. — 1998. — № 5. — С. 87–96.
  8. Сиренко, В. В. Репродуктивная функция молочных коров при нарушении обмена веществ и её коррекция: автореф. дис. кан. вет. наук / В. В. Сиренко. — Краснодар, 2013. — 19 с.
  9. Скориков, А. В. Эпизоотическая ситуация по колибактериозу поросят в Краснодарском крае / А. В. Скориков, А. Ф. Дмитриев, В. И. Терехов // Ветеринария Кубани. — 2015. — № 4. — С. 3–6.
  10. Табачник, А. Л. Энтеротоксигенные E.coli / А. Л. Табачник, Е. С. Гиршович, P. M. Темпер // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология, 1977. — № 3. — С. 31–38.
  11. Терехов, В. И. Факторы адгезии и колициногенная активность Escherichia coli / В. И. Терехов, А. С. Тищенко, И. В. Сердюченко // Вестник ветеринарии. 2015. — № 3 (74). — С. 41–45.
  12. Терехов, В. И. Эпизоотическая ситуация по колибактериозу телят в Краснодарском крае / В. И. Терехов // Ветеринария Кубани. — 2016. — № 3. — С. 15–18.
  13. Тищенко, А. С. Влияние адъювантов на иммуногенные свойства эшерихиозного анатоксина / А. С. Тищенко // Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук / Кубанский государственный аграрный университет. Краснодар, 2011. — 124 с.
Основные термины (генерируются автоматически): антитоксических антител, эшерихиозного анатоксина, свойства эшерихиозного анатоксина, иммуногенные свойства эшерихиозного, Кубанский государственный аграрный, двукратной иммунизации, выработкой антитоксических антител, государственный аграрный университет, иммунизации ЭА, выработка антитоксических антител, бактериального полисахарида, активной выработкой антитоксических, титр антител, Краснодарском крае, ученой степени кандидата, соискание ученой степени, степени кандидата ветеринарных, кандидата ветеринарных наук, Escherichia coli, опытных группах.

Ключевые слова

кролики, эшерихиозный анатоксин, адъюванты, пирогенал, полиакриловая кислота, иммунизация, антитоксические антитела

Обсуждение

Социальные комментарии Cackle
Задать вопрос