Библиографическое описание:

Постоюк Н. А., Маркарян А. А., Даргаева Т. Д., Сокольская Т. А. Методика количественного определения суммы аминокислот в листе каштана конского обыкновенного [Текст] // Новые задачи современной медицины: материалы Междунар. науч. конф. (г. Пермь, январь 2012 г.). — Пермь: Меркурий, 2012. — С. 139-141.

Введение

Основными источниками лекарственного сырья в России являются промышленные заготовки от дикорастущих и возделываемых растений, при этом значительную долю составляют закупки по импорту. Перспективным направлением увеличения заготовок отечественного сырья является расширение его сырьевой базы [2,4].

За последнее время уделялось значительное внимание изучению аминокислотного состава в лекарственном растительном сырье. Аминокислоты – органические кислоты, имеющие в своей структуре аминогруппу в α- или других положениях. Аминокислоты являются структурными компонентами белков и составной частью ферментов, витаминов и других, важных для организма органических соединений. Растения синтезируют все аминокислоты, в отличие от организма животного и человека, неспособного синтезировать некоторые из них (незаменимые аминокислоты). Дефицит незаменимых аминокислот организм человека восполняет с растительной пищей. Аминокислоты необходимы для полноценной работы головного мозга, являясь предшественниками нейромедиаторов [1,3,5].

Перспективным источником создания лекарственных препаратов на основе лекарственного сырья является каштан конский обыкновенный.

Материалы и методы

В качестве объекта исследования использовали образцы листа каштана конского обыкновенного, собранного в парковой зоне города Москвы осенью 2010 г. Для определения суммы аминокислот в листьях была использована методика, основанная на реакции взаимодействия аминокислот с раствором нингидрина и последующем спектрофотометрировании полученного окрашенного комплекса при длине волны около 570 нм. В ходе эксперимента нами была уточнена длина волны максимума поглощения окрашенного комплекса с нингидрином глютаминовой кислоты и водного извлечения из листьев каштана.

Брали 5,0000 г (точная навеска) растительного сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм, помещали в колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 50 мл воды дистиллированной и нагревали с обратным холодильником на кипящей водяной бане в течение часа. Охлаждали, извлечение фильтровали через обеззоленный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл. Объем доводили до метки водой, перемешивали (исследуемый раствор).

Около 0,0500 г (точная навеска) кислоты глютаминовой помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяли в 20-30 мл воды и доводили раствор водой до метки (РСО).

0,5 мл исследуемого раствора помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляли 1 мл 0,25% раствора натрия карбоната, 2 мл спиртового раствора нингидрина и нагревали 10 минут на кипящей водяной бане. После охлаждения раствор доводили водой до метки. Параллельно в мерную колбу вместимостью 50 мл помещали 2 мл раствора РСО кислоты глютаминовой. Оптическую плотность полученных растворов измеряли на спектрофотометре при длине волны 568 нм в кювете с толщиной слоя жидкости 10 мм относительно воды. Содержание суммы аминокислот в сырье в % Х, в пересчёте на кислоту глютаминовую. Рассчитывали по формуле:

Х = D* ∙ М ∙ 50 ∙ 2 ∙ 50 ∙ 100, где

D ∙ m ∙ 0,5 ∙ 100 ∙ 50 ∙ (100 - W)

D* – оптическая плотность испытуемого раствора, в нм;

D – оптическая плотность РСО глютаминовой кислоты, в нм;

М – масса РСО глютаминовой кислоты, в г;

m – масса сырья, в г;

W – потеря массы при высушивании сырья, в %.

Результаты и обсуждения

По полученным данным комплекс глютаминовой кислоты и нингидрина имеет максимум поглощения при длине волны 568±2 нм. Комплекс водного извлечения с нингидрином имеет максимум поглощения при длине волны 568,5 ±2нм (рис. 1 и 2).

Рис. 1. УФ-спектр комплекса водного раствора РСО глютаминовой кислоты с раствором нингидрина

Рис. 2. УФ-спектр комплекса водного извлечения из листьев каштана с раствором нингидрина.

С использованной разработанной методикой проанализированы образцы листа каштана конского обыкновенного и показаны в таблице 1 и 2.

Таблица 1

Результаты количественного определения суммы аминокислот в листьях каштана, в пересчёте на глютаминовую кислоту.

Образец

Содержание

аминокислот, в %

1

0,76

2

0,76

3

0,77

4

0,78

5

0,78

_

Х%


0,77


Таблица 2

Метрологические характеристики результатов спектрофотометрического количественного определения аминокислот, в пересчете на глютаминовую кислоту.

Наименование

n

f

Р%

t (Р,f)

_

Х%

S2

S

_

&#; Х

_

E%

Показатели

5

4

95

2,78

0,77

0,0001

0,01

0,0124

1,61


Согласно проведенным исследованиям, в листьях каштана конского обыкновенного, количественное содержание свободных аминокислот колеблется в пределах около 0,77%.

Достоверность предложенной методики определения суммарного содержания аминокислот подтверждена опытами с добавками кислоты глютаминовой. Результаты опытов представлены в таблице 3.

Относительная ошибка опытов с добавками находится в пределах случайной ошибки предложенной методики, что свидетельствуют об отсутствии систематической ошибки методики.

Таблица 3

Результаты количественного определения аминокислот в листьях каштана с добавками

глютаминовой кислоты

Содержание

аминокислот в навеске, мг

Добавлено

глютаминовой кислоты, мг

Должно быть, мг

Найдено

глютаминовой кислоты, мг

Ошибка


Абсолютная, мг

Относительная,

%

0,85

0,1

0,95

0,94

-0,01

-1,06

0,85

0,2

1,05

1,04

-0,01

-0,96

0,85

0,3

1,15

1,14

+0,01

+0,87


Результаты статистической обработки проведенных опытов свидетельствует о том, что ошибка единичного определения суммы аминокислот, в пересчете на глютаминовую кислоту в листе каштана конского обыкновенного с доверительной вероятностью 95%, составляет ±1,61%.

Таким образом, разработана методика количественного определения суммы аминокислот в листе каштана конского обыкновенного с использованием спектрофотометрии.


Выводы

  1. Подобраны оптимальные условия методики для спектрофотометрического определения суммы аминокислот листа каштана конского обыкновенного по реакции с нингидрином.

  2. Разработана методика количественного определения суммы аминокислот в пересчете на РСО глютаминовой кислоты.

  3. Количественное содержание суммы аминокислот в пределах 0,77% (в пересчете на глютаминовую кислоту).

  4. Ошибка единичного определения с доверительной вероятностью 95% составляет ±1,61%.


Литература:

  1. Гринштейн Дж., Виниц М. Химия аминокислот и пептидов, пер. с англ., [М.], 1965;

  2. Гончарова Т.А., Гончарова Т. А. Энциклопедия лекарственных растений:— М.: Изд. дом "МСП", 1997.

  3. Дзюба В.Ф., Николаевский В.А. Щербаков В.М. Коренская И.М. Лекарственные растения в фитотерапии Практическое пособие. - Воронеж: Изд-во ВГУ, 2004. - 83 с.

  4. Р.М. Середин С.Д. Соколов Лекарственные растения и их применения Ставрополь, 1969.

  5. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. — М.: Медицина, 1983. — С. 426-579.

Основные термины (генерируются автоматически): определения суммы аминокислот, каштана конского обыкновенного, количественного определения, количественного определения суммы, мерную колбу вместимостью, листе каштана конского, глютаминовой кислоты, длине волны, листа каштана конского, количественного определения белка, методика количественного определения, РСО глютаминовой кислоты, мл воды, образцы листа каштана, мл раствора РСО, глютаминовую кислоту, водного извлечения, Содержание суммы аминокислот, кипящей водяной бане, мл спиртового раствора.

Обсуждение

Социальные комментарии Cackle
Задать вопрос