Определение флавоноидов в траве Володушки золотистой (Herba Bupleuri aurei) методом ВЭЖХ | Статья в сборнике международной научной конференции

Библиографическое описание:

Канунникова Ю. С., Джавахян М. А. Определение флавоноидов в траве Володушки золотистой (Herba Bupleuri aurei) методом ВЭЖХ [Текст] // Новые задачи современной медицины: материалы II Междунар. науч. конф. (г. Санкт-Петербург, май 2013 г.). — СПб.: Реноме, 2013. — С. 88-90. — URL https://moluch.ru/conf/med/archive/86/3921/ (дата обращения: 23.10.2018).

Трава Володушки золотистой(Herba Bupleuri aurei) обладает выраженным желчегонным, гепатопротекторным и антиоксидантным эффектами и может быть использована при патологии гепатобилиарной системы. Согласно литературным данным комплекс БАВ травы Володушки золотистой, оказывающий терапевтический эффект содержит флавоноидные соединения.

Целью работы является идентификация и количественное определение содержания флавоноидов в траве Володушки золотистой (Herba Bupleuri aurei).

Объектом исследования служила трава Володушки золотистой (Herba Bupleuri aurei). Образцы сырья собраны на территории Алтайского края, близ Барнаула, Бийска, Горно-Алтайска, а также близ Уфы и Новосибирска. Сырье заготовлено в период начала цветения (июнь) в фазе максимального накопления действующих веществ.

Экспериментальная часть. Изучение содержание флавоноидов в сырье проводили методом обращеннофазной ВЭЖХ с фотометрическим детектированием на приборе Аligent 1100. Были использованы следующие стандарты: Кверцетин (ICC Inc, USA Indofine); CAS: 117–39–5.; Кемпферол (ICC (Indofinе Chemical Company), Inc, USA); CAS: 520–18–3; Изорамнетин (ICC Inc, USA Indofine); CAS: 480–19–3; Лютеолин (ICC Inc, USA Indofine) CAS: 491–70–3, Гиперозид (кверцетин 3-О-галактозид) CAS 482–36–0–83388F (Sigma-Aldrich Chemie GmbH), Рутин CAS 207671–50–9 — R5143 (Sigma-Aldrich Chemie GmbH), Астрагалин CAS 480–10–4 (Sigma-Aldrich Chemie GmbH).

Определение флавоноидов — агликонов.

Приготовление стандартного образца. Для приготовления стандартного образца с концентрацией 0,05 мг/см3 5 мг стандарта помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят объем до метки метанолом.

Подготовка пробы для анализа. Навеску измельченной травы 1,0 г помещали в круглодонную колбу, добавляют 100 см3 70 % этанола и 2 мл соляной кислоты и нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 1 часа 30 мин. Раствор количественно переносили в мерную колбу на 100 см3 и доводят до метки 70 % этанолом. Затем колбу помещали на 5 минут в ультразвуковую баню. Затем пробу для ВЭЖХ анализа фильтровали через мембранный фильтр и использовали для проведения анализа.

Условия хроматографического анализа:

Колонка: октадецилсиликагель 5мкм, 250×4,6 (например, Phenomenex Luna 5мкм C18(2));

Подвижная фаза: ацетонитрил — раствор трифторуксусной кислоты рН 2,6 (40:60); Скорость подвижной фазы: 1,0 см3/мин;

Температура колонки: 30ОС;

Детектирование: УФ, λ= 365 нм.

Объем вводимой пробы: 10 мм3

Расчет содержания индикаторных компонентов осуществляют по градуировочному графику или по формуле:

X = C × S1 × V

S2× m,

где: С — концентрация соответствующего стандартного раствора, мг/см3;

S1 –площадь пика определяемого компонента в анализируемой пробе;

S2 — площадь пика определяемого компонента в стандартном образце;

V — общий объем разведения образца, см3;

m — масса навески, г;

Рис. 1. Хроматограмма травы Володушки золотистой (Лютеолин, Кверцетин, Кемпферол, Изорамнетин)

В соответствии с результатами анализа содержание агликонов в образцах травы Володушки золотистой составило: Лютеолин — 0,1 мг/г, Кверцетин — 3,6 мг/г, Кемпферол — 0,3 мг/г, Изорамнетин — 2,1 мг/г.

Определение Гиперозида, Астрагалина и Рутина.

Подготовка стандартного образца. Для приготовления растворов стандартных образцов с концентрацией 0,1 мг/см3 точные навески 10,0±0,1мг гиперозида и 10,0±0,1мг рутина переносят в мерные колбы вместимостью 100 см3, до половины заполненные метанолом, перемешивают до полного растворения веществ, доводят до метки и тщательно перемешивают.

Подготовка пробы для анализа. Навеску измельченной травы 1,0 г помещают в круглодонную колбу, добавляют 100 см3 50 % этанола и нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 30 мин. Раствор количественно переносят в мерную колбу на 100 см3 и доводят до метки 50 % этанолом. Затем колбу помещают на 5 минут в ультразвуковую баню.

Условия хроматографического анализа:

Колонка: октадецилсиликагель 5мкм, 250×4,6 (например, Phenomenex Luna 5мкм C18(2));

Скорость подачи элюента: 1,0 см3/мин;

Детектирование: УФ, λ=360 нм;

Объем вводимой пробы: 10 мм3;

Подвижная фаза:      трихлоруксусная кислота, рН=2,5 – 70 %

ацетонитрил — 30 %

Рисунок 2. Хроматограмма травы Володушки золотистой (Рутин, Гиперозид, Астрагалин).

Расчет содержания индикаторных компонентов осуществляют по градуировочному графику или по формуле:

X = C × S1 × V

S2× m,

где: С — концентрация соответствующего стандартного раствора, мг/см3;

S1 –площадь пика определяемого компонента в анализируемой пробе;

S2 — площадь пика определяемого компонента в стандартном образце;

V — общий объем разведения образца, см3;

m — масса навески, г

В соответствии с результатами анализа содержание Рутина в образцах травы Володушки золотистой составил — 2,1 мг\г, Гиперозида — 1,6 мг\г, Астрагалина — 0,1 мг\г.

Выводы: Проведенное исследование показало наличие в траве Володушки золотистой (Herba Bupleuri aurei) Лютеолина — 0,1 мг/г, Кверцетина — 3,6 мг/г, Кемпферола — 0,3 мг/г, Изорамнетина — 2,1 мг/г, Рутина — 2,1 мг\г, Гиперозида — 1,6 мг\г, Астрагалина — 0,1 мг\г. Полученные результаты будут использованы в дальнейшем фитохимическом анализе сырья.

Литература:

1.                              Беликов В. В., Шрайбер М. С. Методы анализа флавоноидных соединений// Фармация, 1970. — № 1.

2.                              Головкин Б. Н. Биологически активные вещества растительного происхождения.-М.: Наука, 2001.

3.                              Гордиенко А. Д. Гепатопротекторный механизм действия флавоноидов// Фармация.-1990.-№ 3

4.                              Croft K. D. The chemistry and biological effects of flavonoids and phenolic acids// Annals New York Academy of Sciences. 1998, Vol.854

Основные термины (генерируются автоматически): трава Володушки, стандартный образец, площадь пика, определяемый компонент, Подвижная фаза, УФА, мерная колба, обратный холодильник, градуировочный график, водяная баня.

Похожие статьи

Разработка метода ВЭЖХ для идентификации замещенных...

Для градуировки ВЭЖХ-системы использовалось чистое синтезированное вещество как внешний стандартный образец.

Подвижная фаза: ацетонитрил — раствор трифторуксусной кислоты рН 2,6 (40:60)

Определение флавоноидов в траве Володушки золотистой...

Использование метода Лоури для количественного определения...

Рис. 1. При построении калибровочных графиков использовали раствор стандартного образца. Для этого в мерную колбу вместимостью 25 мл вносили, соответственно, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 …

Методика количественного определения суммы аминокислот...

глютаминовая кислота, лист каштана, сумма аминокислот, мерная колба, длина волны, аминокислота, оптическая плотность, водное извлечение, доверительная вероятность, кипящая водяная баня.

Автоматизация процесса определения прозрачности воды для...

Метод количественного определения прозрачности основан на определении высоты водяного столба, при которой еще можно визуально различить

Оборудование: Ламинированный образец щрифта (высота 3,5 мм, ширина линии 0,35 мм) или юстировочная метка (2 шт.).

Метод ASLT для определения сроков годности функциональных...

Температура и время выдержки обработанной мезги составляла 45–55°C в течение 40 минут на водяной бане.

Полученный напиток отфильтровывали в круглодонную, стерильную колбу со шлифом. Полученный напиток составлен из следующих компонентов: зелёный китайский чай...

Экспресс-методы определения ионов меди и кадмия...

В ходе эксперимента определяли содержание подвижных форм кадмия с помощью экспресс — методов и стандартными методиками (табл. 2). Для проведения эксперимента с помощью КФК — 2 был построен калибровочный график (рис. 2). Таблица 2.

Совершенствование методов определения площади земельных...

Перед измерениям площадей необходимо определить цену деления планиметра.

Изучив механизм построения данного шифра, удалось зашифровать слово, расшифровка которого является обратным процессом.

Комплексная оценка массообменных и энергетических...

где - коэффициент массоотдачи в газовой фазе, м/с; - площадь поперечного сечения колонны, м2; - средняя скорость газа в колонне, м/с; - коэффициент

На рисунке 3 изображен сравнительный график эффективности для клапана НТС, турбодетандера и 3S сепаратора.

Проточно-инжекционные амперометрические системы...

В таблице 4 показана зависимость выходного сигнала датчика с таким трубчатым электродом от концентрации йода, на основании которой строится градуировочный график.

 фоновый электролит (подвижная фаза) — 0,1 М натрий ацетатный буфер, рН 3,8–4,0 и 0,3 М по KCI

Обсуждение

Социальные комментарии Cackle

Похожие статьи

Разработка метода ВЭЖХ для идентификации замещенных...

Для градуировки ВЭЖХ-системы использовалось чистое синтезированное вещество как внешний стандартный образец.

Подвижная фаза: ацетонитрил — раствор трифторуксусной кислоты рН 2,6 (40:60)

Определение флавоноидов в траве Володушки золотистой...

Использование метода Лоури для количественного определения...

Рис. 1. При построении калибровочных графиков использовали раствор стандартного образца. Для этого в мерную колбу вместимостью 25 мл вносили, соответственно, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 …

Методика количественного определения суммы аминокислот...

глютаминовая кислота, лист каштана, сумма аминокислот, мерная колба, длина волны, аминокислота, оптическая плотность, водное извлечение, доверительная вероятность, кипящая водяная баня.

Автоматизация процесса определения прозрачности воды для...

Метод количественного определения прозрачности основан на определении высоты водяного столба, при которой еще можно визуально различить

Оборудование: Ламинированный образец щрифта (высота 3,5 мм, ширина линии 0,35 мм) или юстировочная метка (2 шт.).

Метод ASLT для определения сроков годности функциональных...

Температура и время выдержки обработанной мезги составляла 45–55°C в течение 40 минут на водяной бане.

Полученный напиток отфильтровывали в круглодонную, стерильную колбу со шлифом. Полученный напиток составлен из следующих компонентов: зелёный китайский чай...

Экспресс-методы определения ионов меди и кадмия...

В ходе эксперимента определяли содержание подвижных форм кадмия с помощью экспресс — методов и стандартными методиками (табл. 2). Для проведения эксперимента с помощью КФК — 2 был построен калибровочный график (рис. 2). Таблица 2.

Совершенствование методов определения площади земельных...

Перед измерениям площадей необходимо определить цену деления планиметра.

Изучив механизм построения данного шифра, удалось зашифровать слово, расшифровка которого является обратным процессом.

Комплексная оценка массообменных и энергетических...

где - коэффициент массоотдачи в газовой фазе, м/с; - площадь поперечного сечения колонны, м2; - средняя скорость газа в колонне, м/с; - коэффициент

На рисунке 3 изображен сравнительный график эффективности для клапана НТС, турбодетандера и 3S сепаратора.

Проточно-инжекционные амперометрические системы...

В таблице 4 показана зависимость выходного сигнала датчика с таким трубчатым электродом от концентрации йода, на основании которой строится градуировочный график.

 фоновый электролит (подвижная фаза) — 0,1 М натрий ацетатный буфер, рН 3,8–4,0 и 0,3 М по KCI

Задать вопрос