Влияние митофена на биохимические показатели сыворотки крови цыплят, вакцинированных против ИББ на фоне экспериментального хронического полимикотоксикоза



Установлено, что иммунизация цыплят против ИББ на фоне экспериментального хронического полимикотоксикоза приводит к глубоким метаболическим нарушениям, которые сопровождаются достоверным повышением по сравнению с контролем активности АсТ, концентрации триглицеридов и общего билирубина. У цыплят, получавших микотоксины и не вакцинированных против ИББ, выявлены сходные, но менее выраженные изменения. Использование антиоксиданта митофена профилактирует развитие метаболических нарушений в сыворотке крови птиц, и, следовательно, способствует смягчению остаточных реактогенных свойств вирус-вакцины против ИББ и токсического действия микотоксинов.

Ключевые слова: митофен, цыплята, вакцинация, инфекционная бурсальная болезнь, микотоксины, индикаторные ферменты, метаболиты.

О применении антиоксидантов для стимуляции иммунной системы птиц сообщают многие ученые [2, 6]. Ретинол повышает уровень анти­тел в сыворотке крови, стимулирует активность естественных киллерных клеток (больших зернистых лимфоцитов) и влияет на пролиферацию Т-хелперов. Витамин Е (токоферол) активизирует как клеточный, так и гуморальный им­мунитет, а в крови увеличивается количество Т- и В-лимфоцитов за счет стимуляции митотической активности их бластных форм. Аскорбиновая кислота уменьшает лимфоцитотоксический эффект, ассоциированный с глюкокортикоидами, и слу­жит иммунологическим промотором в тканях от воздействия стероидов.

В ФБГНУ ВНИВИП изучается влияние на организм птиц нового антиоксидантного препарата – митофена. Он относится к син­тетическим производным полифенолов и является структурным (химическим) аналогом коэнзима Q10 – естественного метаболита клеток организма животных и птиц. Митофен обладает витаминоподобным действием, проявляет антигипоксическую, антиоксидантную, антистрессовую активность за счёт уменьшения воздействия свободнорадикального окисления клеточных структур живого организма. Под воздействием митофена повышается коэффициент аэробного (митохондриального) окисления клеток, что способствует возрастанию усвоения энергии и более экономичному её расходованию организмом. В виду низкой токсичности и широкого спектра действия митофен может оказаться весьма перспективным для использования в народном хозяйстве и, в частности, в птицеводстве [3, 8]. Вместе с тем, влияние митофена на процессы иммуногенеза у птиц остаются неизученными.

Исследования были проведены на 100 цыплятах 1-дневного возраста, подобранных по принципу аналогов и разделенных на 5 групп, по 20 птиц в каждой.

Цыплят 1 группы иммунизировали против ИББ на фоне применения антиоксиданта митофена и комбикорма, естественно контаминированного токсинами грибов в концентрациях: афлатоксин B1 - 0,001 мг/кг; Т-2 токсин – 0,09 мг/кг; деоксиниваленол (ДОН) - 1,24 мг/кг; зеараленон - 0,068 мг/кг; охратоксин - 0,005 мг/кг; фумонизины - 0,2 мг/кг корма. Данный препарат применяли цыплятам в период с 8 по 22 день жизни. Митофен вводили ежедневно, перорально, с водой в дозе 50 мг/кг живой массы. В 15 и 22-дневном возрасте цыплят данной группы иммунизировали против ИББ вирус-вакциной из шт. “Винтерфильд 2512”. Вакцину применяли согласно Инструкции по ее применению, перорально, 2-кратно. Цыплят 2-ой группы в 15 и 22-дневном возрасте иммунизировали против ИББ вирус-вакциной из шт. “Винтерфильд 2512”. Цыплятам этой группы скармливали комбикорм, загрязненный микотоксинами, но без применения митофена. Цыплят 3 группы в 15 и 22-дневном возрасте иммунизировали против ИББ вакциной из шт. “Винтерфильд 2512” на фоне скармливания комбикорма, не загрязненного микотоксинами. Митофен они не получали. Цыплятам 4 группы в течение всего цикла выращивания скармливали комбикорм, естественно контаминированный токсинами грибов. Иммунизация против ИББ не проводилась. Митофен цыплятам этой группы также не применяли. Цыплятам 5 группы в течение всего цикла выращивания скармливали комбикорм, не контаминированный токсинами грибов. Иммунизация против ИББ не проводилась. Митофен цыплятам этой группы также не применяли.

На 7 день после первой, 7 и 14 дни после второй вакцинации от 5 птиц из каждой группы отбирали пробы крови для получения сыворотки. Активность АсТ и АлТ в сыворотке крови определяли кинетически [4] на биохимическом анализаторе «Cormay» с помощью стандартизированных (сертифицированных) наборов реактивов. Активность ферментов выражали в МЕ/л. Концентрацию билирубина в сыворотке крови определяли модифицированным методом Маллоя-Эвелин, мочевой кислоты - ферментативным (уреазным) методом, триглицеридов - сульфофосфованилиновым методом, общего холестерина – ферментативным методом [4, 5]. Содержание общего холестерина и триглицеридов выражали в ммоль/л, общего билирубина и мочевой кислоты – в мкмоль/л. Цифровые данные обработаны статистически с использованием программы Microsoft Excel 2003.

Результаты исследований показали, что на 7 день после первой вакцинации активность АлТ в сыворотке у цыплят 5 группы (контроль) составила 37,00±3,93 МЕ/л. У птиц 2 группы данный показатель достоверно превышал контрольные значения на 47%. У птиц 1, 3 и 4 групп отмечалось незначительное повышение активности данного фермента, однако достоверно это не подтверждалось.

У птиц 2 группы во второй и третий сроки исследования данный показатель был достоверно выше по сравнению с птицей 5 группы (контроль) на 38% и 57% и 3 группы (вакцина) на 28-33%. У цыплят 4 группы на 14 день после 2 вакцинации наблюдалось повышение активности АлТ по сравнению с контролем на 41 (Р<0,05). У птиц 1 и 3 групп активность АлТ существенно не отличалась от контроля на протяжении всего эксперимента.

Активность АсТ в первый срок исследования у цыплят контрольной группы составила 100,20±8,15 МЕ/л. У птиц 1-4 групп этот показатель существенно не отличался от контроля. Во второй срок исследования установлено достоверное повышение активности данного фермента у птиц 2 группы по сравнению с контролем на 37%. На третьем этапе исследования данный показатель у цыплят 2-4 групп был выше, чем в контроле, однако достоверно это не подтверждалось. По данным В.С. Камышникова [4], изменение активности АсТ объективно отражает метаболические нарушения в печени. Наши предположения подтверждаются результатами исследований С.Л. Радченко [7], В.М. Холода и Л.Н. Громовой [9], И.Н. Громова [1], которые отмечали повышение активности аминотрансфераз в сыворотке крови птиц при вакцинации против других инфекционных болезней.

Концентрация триглицеридов в сыворотке крови птиц контрольной группы в первый срок исследования составила 0,46±0,04 ммоль/л. У птиц 2 группы наблюдалось достоверное повышение данного показателя по сравнению с контролем на 48%. Гипертриглицеридемия является объективным показателем целого ряда патологических процессов, в том числе – жировой дистрофии печени и интерстициального гепатита [5], что согласуется с результатами гистологического исследования печени цыплят 2 группы.

Во второй и третий сроки исследования концентрация триглицеридов у птиц 2 группы была выше по сравнению с контролем на 56 и 70%, а по сравнению с птицей 1 группы – на 44 и 42% соответственно. У птиц 4 группы данный показатель превышал контрольные значения на 30 и 46% соответственно.

У цыплят 1 и 3 групп концентрация триглицеридов существенно не отличалась от контроля в течение всего эксперимента.

Концентрация общего холестерина в сыворотке крови цыплят контрольной группы на 7 день после 1 вакцинации была 4,21±0,37 ммоль/л. На таком же уровне данный показатель сохранялся до конца эксперимента. Никаких достоверных отличий уровня общего холестерина у цыплят 1-4 групп по сравнению с контролем в течение всего периода наблюдений обнаружено не было.

Концентрация общего билирубина в сыворотке крови контрольных цыплят в первый срок опыта составила 3,15±0,20 мкмоль/л. У птиц 2 и 4 групп отмечалось достоверное повышение данного показателя по сравнению с контролем на 35 и 22% соответственно. По данным В.С. Камышникова [5], гипербилирубинемия является важным показателем повреждения мембран и цитолиза гепатоцитов печени. Такая же картина наблюдалась в течение всего эксперимента. Так, во второй срок опыта уровень билирубина у птиц 2 и 4 групп был достоверно выше, чем в контроле, на 27 и 13%, а в третий – на 40 и 33% соответственно. Однако у цыплят 1 группы, вакцинированных с применением митофена, концентрация билирубина была на уровне контроля и на 27-31% достоверно ниже по сравнению с птицей 2 группы.

Концентрация мочевой кислоты в сыворотке крови цыплят контрольной группы в течение всего эксперимента была в интервале 161,25±9,83 – 181,50±9,2 мкмоль/л. У птиц 1-4 групп достоверных отличий данного показателя во все сроки исследования по сравнению с контролем и друг с другом нами не обнаружено.

Заключение. Иммунизация цыплят против ИББ на фоне экспериментального хронического полимикотоксикоза приводит к метаболическим нарушениям, которые сопровождаются достоверным повышением по сравнению с контролем активности АлТ на 38-57%, концентрации триглицеридов на 42-48% и общего билирубина на 27-35%. Указанные изменения обусловлены, по-видимому, развитием жировой дистрофии, некроза и лизиса гепатоцитов печени птиц под влиянием микотоксинов и вакцинного антигена. У цыплят, получавших микотоксины и не вакцинированных против ИББ, выявлены сходные, но менее выраженные изменения. Иммунизация цыплят против ИББ на фоне доброкачественного кормления не вызывала существенных изменений биохимических показателей сыворотки крови. Использование антиоксиданта митофена профилактирует развитие метаболических нарушений в сыворотке крови птиц, и, следовательно, способствует смягчению остаточных реактогенных свойств вирус-вакцины против ИББ и токсического действия микотоксинов. Иммунизация против ИББ без и с применением митофена получавших микотоксины цыплят не оказывает существенного влияния на содержание общего холестерина и мочевой кислоты в сыворотке крови подопытных цыплят.

Литература:

1. Громов, И.Н. Биохимические показатели плазмы крови птиц, вакцинированных против инфекционного ларинготрахеита / И.Н. Громов, Л.Н. Громова, С.П. Герман // Проблеми зооiнженерiї та ветеринарної медицини : збирнiк навукових праць / Харькiвска державна зооветеринарна академiя ; редкол.: В.О. Головко (отв. ред.) [и др.]. – Харкiв, 2007. – Випуск 15(40). - Частина 2. – Том 1. - С. 240-245.
2. Дранник, Г.Н. Иммунотропные препараты / Г.Н. Дранник, Ю.А. Гриневич, Г.М. Дизик. – Киев : Здоровье, 1994. – 288 с.
3. Изучение острой токсичности антиоксидантов митофена и мексидола / А.В. Святковский [и др.] // Ветеринарная Практика, 2011, №1(52). - С. 48-49.
4. Камышников, В.С. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике : в 2 т. / В.С. Камышников. – Минск: Беларусь, 2000. – Т. 1. – 495 с.
5. Камышников, В.С. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике: в 2 т. / В.С. Камышников. – Минск : Беларусь, 2000. – Т. 2. – 463 с.
6. Лазарева, Д.Н. Стимуляторы иммунитета / Д.Н. Лазарева, Е.К. Алехин. – М. : Медицина, 1985. – 256 с.
7. Радченко, С.Л. Активность некоторых ферментов сыворотки крови гусят при иммунизации против пастереллеза / С.Л. Радченко // Ученые записки ВГАВМ: материалы III научно-практической конференции, Витебск, 25-26 апреля 2000 г. / ВГАВМ; редкол.: А.И. Ятусевич [и др.]. – Витебск, 2000. – Т. 36, ч.1 – С. 79-80.
8. Святковский, А.В. Влияние митофена на здоровье и продуктивность птицы / А.В. Святковский // Модернизация АПК – механизмы взаимодействия государства, бизнеса и науки : матер. междунар. агропром. Конгресса. - СПб.: Ленэкспо, 2011. – С. 18.
9. Холод,В.М. Индикаторные ферменты и метаболиты сыворотки крови утят, вакцинированных против вирусного гепатита / В.М. Холод, Л.Н. Громова // Ученые записки УО ВГАВМ. – Витебск, 2005. – Т.41, вып.1. – С. 100-103.