Библиографическое описание:

Миханов В. А., Шурыгина Е. И. Особенности приживления аутодермотрансплантатов при воздействии препарата «Винфар» [Текст] // Медицина: вызовы сегодняшнего дня: материалы Междунар. науч. конф. (г. Челябинск, июнь 2012 г.). — Челябинск: Два комсомольца, 2012. — С. 14-16.

Введение

Приживление кожных лоскутов при проведении аутодермопластики в 20 – 40% сопровождается в последующем лизисом трансплантатов [1]. Одной из основных причин неудовлетворительных исходов является несостоятельность механизмов репаративного гистогенеза. Ключевую роль в пролиферации и дифференцировке различных клеток кожи и других тканей играет группа пептидов, относящихся к фактору роста фибробластов (ФРФ) [5]. В настоящее время проводятся экспериментальные исследования для определения возможностей применения ФРФ в медицине [3, 4, 6]. В 2009 году в эксперименте сотрудниками кафедры травматологии и ортопедии ОрГМА под руководством профессора В.И. Никитенко были получены продукты жизнедеятельности бактерий штамма Bacillus subtilis 804, стимулирующие рост фибробластов человека в культуре. После проведенных экспертиз в институте им. Склифосовского было подтверждено наличие в данных метаболитах ФРФ (Патент № 2427644 от 27.08.2011). На основе данных метаболитов в 2011 году В.И. Никитенко разработан и зарегистрирован препарат «Винфар» (Свидетельство на товарный знак № 433087 от 23.03.2011), выпускаемый в настоящее время ООО «Бакорен». Таким образом, несомненный интерес представляет изучение структурно-функциональных аспектов биостимулирующего влияния препарата «Винфар» на процессы репаративной регенерации, что до сих пор не проводилось.

Цель работы – изучение влияния препарата «Винфар» на процессы заживления глубоких ожоговых ран кожи при проведении аутодермопластики.

Материалы и методы

Экспериментальные исследования проводили на 40 крысах-самцах линии «Вистар» массой 180,0 ± 10,0 г. Была использована модель ожоговой раны кожи (термический ожог III Б степени). Сорока крысам под фторотановым наркозом на предварительно выбритые участки в межлопаточной области спины были нанесены глубокие контактные ожоги площадью 2 см2 (аппликация на кожу в течение 35 c плоского дна стеклянной пробирки с водой нагретой до 100°C). После формирования струпа на 7-9 сутки была выполнена некрэктомия. После очищения ран и формирования грануляционной ткани на 14-15 сутки эксперимента выполнялась аутодермопластика. Аутодермотрансплантат (АДТ) забирали с выбритого участка спины марочным способом. Животные были разделены на 2 группы по 20 крыс: 1опытная, крысам которой зону раневого дефекта кожи непосредственно перед укладкой АДТ орошали 1,0 мл препарата «Винфар»; 2 – контрольная, в которой на рану наносили 1,0 мл физиологического раствора. Животных выводили из опыта на 3, 7, 11 и 21 сутки после нанесения ожоговой раны кожи. Забой и взятие материала осуществлялись согласно «Правилам проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приказ Минвуза от 13.11.1984 г. № 724). У опытных и контрольных животных иссекали участки кожи с послеоперационными ранами и подлежащими тканями. Кусочки тканей фиксировали в 10% растворе формалина, забуференного по Лилли, затем обезвоживали в этаноле возрастающей крепости и заливали в целлоидин-парафин по общепринятой методике. Гистосрезы толщиной 5-6 мкм после депарафинизации исследовали при помощи световой микроскопии с применением гистологического (окраска гематоксилином Майера и эозином), гистохимического (окраска по Маллори, по Ван-Гизону, толуидиновым синим), иммуногистохимического (выявление экспрессии белка Ki-67, коллагена I – IV типа) методов исследования и морфометрии. В ходе иммуногистохимического исследования использовали моноклональные антитела и систему визуализации фирмы BioGenex, США.

Результаты и обсуждение

При гистологическом исследовании обнаружено, что из десяти контрольных животных только у четырех после фиксации и проводки материала АДТ были тесно связаны с подлежащей тканью. В условиях опыта все пересаженные кусочки оказались прочно фиксированы к месту пересадки.

На 11 сутки после пересадки кожи в толще АДТ контрольной группы животных сохраняется слабовыраженная, но диффузная лимфо-гистиоцитарная инфильтрация с примесью эозинофилов, проникающая из подлежащего раневого ложа. В краевых участках АДТ митотическая активность клеток базального и шиповатого слоев выросла до 45,8±0,5 ‰ по сравнению с участками, удаленными от этой зоны (18,3±0,4‰), что подтверждается иммуногистохимическим исследованием на выявление экспрессии белка Ki-67 в пролиферирующих клетках.

В почти редуцированной грануляционной ткани под АДТ, иногда встречаются очаги расширенных полнокровных сосудов, питающих пересаженный участок кожи. В результате эпителизации с краёв АДТ образуется немногослойный эпидермис, который рыхло связан с подлежащей тканью, а многослойное строение с признаками ороговения отмечается только в проксимальных отделах. Под эпидермисом располагается незрелая неоформленная рыхлая соединительная ткань с большим количеством фибробластов, внеклеточного матрикса, полнокровными и ещё многочисленными сосудами, и сохраняющейся лимфо-лейкоцитарной инфильтрацией. В соединительной ткани продолжается фибриллогенез – образуются тонкие волокона незрелого коллагена III типа, беспорядочно расположенные в толще фибриллярного матрикса.

В толще АДТ опытной группы на 11 сутки после пересадки сохраняется лишь очаговая лимфогистиоцитарная инфильтрация только в краевых отделах на границе с участками реэпителизации. В остальном строение АДТ напоминает строение интактной кожи краёв раны.

Краевая эпителизация на 11 сутки после аутодермопластики завершена, многослойный эпидермис приобретает все функциональные слои (5-6 слоёв) и признаки поверхностной кератинизации. Что соответствует общепризнанным представлениям о нормальном строении эпидермиса кожи крыс [2]. Подлежащая соединительная ткань с небольшим количеством сосудов, волокнистый матрикс преобладает над аморфным, волокна расположены с заметным выравниванием параллельно фибробластам и базальной мембране эпидермиса, что определяется функциональной нагрузкой на вновь образованную ткань. Выражен синтез зрелого коллагена I типа, почти отсутствующий у животных контрольной группы на этом же сроке эксперимента. Сохраняется незначительный диффузный лимфо-гистиоцитарный инфильтрат. Среди многочисленных фибробластов начинают появляться единичные фиброциты. В связи с завершением формирования эпителиального пласта, дифференцирующегося на все функциональные слои, показатель митотической активности краевых участков АДТ снижается по сравнению с контролем до 32,3±0,4‰, и остается одинаковым по всей площади пересаженного участка кожи.

В прижившихся АДТ контрольной группы на 21 сутки после пересадки сохраняется слабая, но диффузная лимфо-гистиоцитарная воспалительная инфильтрация со склеротическими изменениями в дерме. В подлежащей к АДТ ткани грануляции редуцированы, но сохраняется лимфогистиоцитарная реакция с многочисленными сидерофагами, которые, вероятно, подтверждают замедленную редукцию сосудов грануляционной ткани ложа АДТ с длительным эритродиапедезом и экстракапиллярным лизисом эритроцитов. Краевая эпителизация выражена слабо, эпителий с подлежащей тканью связан рыхло, легко травмируется и отслаивается, в связи с чем, местами появляются открытые участки грануляций с выраженной воспалительной инфильтрацией и склерозом. Задержка эпителизации ведет к преждевременному склерозированию грануляционной ткани, что, в свою очередь, замедляет эпителизацию таких участков. Под пластом вновь образованного эпителия зрелая грануляционная ткань с признаками редукции сосудов, фибриллогенеза и выраженной воспалительной реакции, что подтверждает асинхронность течения стадий репаративного процесса.

В опыте на 21 сутки после пересадки АДТ по строению и гистоархитектонике идентичен интактной коже данной области и плотно фиксирован с подлежащим ложем, которое представлено так же органотипичной гиподермой с пролиферирующими дериватами. Воспалительная инфильтрация отсутствует, грануляционная ткань полностью редуцирована. Встречная краевая эпителизация с АДТ и с кожи краёв раны завершена, вновь образованный эпидермис, многослойный с признаками ороговения, покрывает плотную неоформленную соединительную ткань, ход волокон, которой чаще параллелен базальной мембране эпидермиса.

Таким образом, морфологическая картина изменений АДТ и репаративного процесса в окружающих его тканях, как на 11 сутки в опытной группе, визуализируется и в условиях контроля, но только на 21 сутки эксперимента. При этом в контроле всё ещё сохраняется диффузный лимфогистиоцитарный инфильтрат, замедлено течение краевой реэпителизации с АДТ, а так же выражен склеротический процесс, как в АДТ, так и в окружающих его тканях. В результате этого на 21 сутки у животных контрольной группы, не смотря на успешное приживление АДТ, не достигнута органотипичность пересаженного участка кожи. Из-за асинхронного течения стадий репарации в окружающих АДТ тканях, процесс восстановления идёт по типу субституции с формированием грубой рубцовой ткани. Несомненна роль тесного взаимодействия процессов эпителизации и роста грануляционной ткани: эпителий обладает способностью стимулировать рост соединительной ткани, а также вырабатывает коллагеназу, участвующую в перестройке рубца. Задержка же эпителизации в контрольной группе ведет к преждевременному склерозированию грануляционной ткани, что, в свою очередь, замедляет эпителизацию таких участков.

Выводы

Данные гистологического исследования доказывают, что у животных, получавших «Винфар», происходит ускоренное восстановление функций клеток-эффекторов репаративного процесса, что обеспечивает благоприятные условия микроокружения для более эффективного и неосложнённого приживления АДТ.


Литература:

  1. Шапкин Ю.Г. Способ повышения эффективности пластического закрытия ран после отморожения // Анналы хирургии. – 2010. – №5. – C.72-74.

  2. Шаповалов Д.А., Голуб А.П. Особенности строения кожи крыс в норме и при действии пирогенала // Морфологія. – 2008. – Т. ІІ. – №2. – С.71-74.

  3. Akita S., Akino K., Imaizumi T. Basic fibroblast growth factor accelerates and improves second-degree burn wound healing // Wound Repair Regen. – 2008. – Vol. 16. – № 5. – P. 635-641.

  4. Bendfeldt K., Radojevic V., Kapfhammer J. Basic fibroblast growth factor modulates density of blood vessels and preserves tight junctions in organotypic cortical cultures of mice: a new in vitro model of the blood-brain barrier // J. Neurosci. – 2007. – Vol. 27. – № 12. – P. 3260-3267.

  5. Böttcher R.T., Niehrs C. Fibroblast growth factor signaling during early vertebrate development // Endocr. Rev. – Vol. 26. – № 1. – P. 63–77.

  6. Yao C., Yao P., Wu H., Zha Z. Acceleration of wound healing in traumatic ulcers by absorbable collagen sponge containing recombinant basic fibroblast growth factor // Biomed. Mater. – 2006. Vol. 1. – № 1. P. 33-37.

Основные термины: грануляционной ткани, препарата «Винфар», fibroblast growth factor, влияния препарата «Винфар», контрольной группы, антилейкотриенового препарата монтелукаст, АДТ контрольной группы, ожоговой раны кожи, применения антилейкотриенового препарата, кожи краёв раны, basic fibroblast growth, базальной мембране эпидермиса, толще АДТ, сутки эксперимента, склерозированию грануляционной ткани, подлежащей тканью, преждевременному склерозированию грануляционной, животных контрольной группы, толще АДТ контрольной, Применение препарата

Обсуждение

Социальные комментарии Cackle