Любой патологический процесс в развивающемся организме формируется одновременно с морфогенезом и в той или иной степени изменяет онтогенетическую кривую [6]. Сукцинатдегидрогеназа (СДГ), лактатдегидрогеназа (ЛДГ) и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа (Г-6-ФДГ) -являются маркерами основного энергообмена митохондрий любой клетки. Митохондриальные ферменты — кардинальный признак нейтрофилов и моноцитов периферической крови, отражает состояние организма в целом. Динамика активности митохондриальных ферментов иммунокомпетентных клеток описывает жизненный цикл человека, одновременно характеризуя течение заболевания, эффективность лечения и прогноз его последствий [7]. Наследственная отягощенность, болезни и лечебные воздействия, адреналин, питание, этанол, антигены, ротавирусы, погода, солнечные и геомагнитные возмущения и т. д. изменяют ферментный статус клеток крови и органов. От исходного состояния энергообмена в определенной степени зависит формирование, развитие и исход заболевания [1].
Во многих исследованиях отмечается, что цитохимия крови позволяет обнаружить еще скрытые проблемы и назначить необходимое лечение до возникновения первых симптомов [2]. Современные технологии позволяют объективно оценить отклонения в функциональной активности внутриклеточных ферментов и нормализовать энергетический обмен клетки, целенаправленно и индивидуально назначив пациенту недостающие элементы [5].
Все вышесказанное делает актуальным тему наших исследований.
В условиях детской поликлиники МУЗ ГБ № 5 было обследовано 57 здоровых детей в возрасте от 1года до 16 лет. Было выделено три возрастных группы: младшая (от 1 года до 5 лет), средняя (от 6 до 12 лет) и старшая (от 12 до 16 лет).
У всех детей проводилось цитохимическое исследование ферментативной активности нейтрофилов. Исследовали следующие ферменты: сукцинатдегидрогеназа(СДГ), отражающая цикл Кребса; лактатдегидрогеназа (ЛДГ), отражающая анаэробный гликолиз; глюкозо-6-фос-фатдегидрогеназа (Г-6-ФДГ), отражающая активность пентозо-фосфатного шунта. Определение проводилось по методике Р. П. Нарциссова. Определение дегидрогеназной и диафоразной активности проводили по методу Р. П. Нарциссова [1970), но с применением нитросинего тетразолия 4-Nitroblautetrazoliumchlorid (Nitro BT) фирмы «Serva» (Германия) вместо указанного у Р. П. Нарциссова тетразолия фиолетового. Выбирая для исследования данную соль тетразолия, мы руководствовались следующими соображениями. Методика Р. П. Нарциссова и им самим и рядом его последователей применяется исключительно при изучении лимфоцитов. Немногочисленные работы по выявлению дегидрогеназной и диафоразной активности в нейтрофилах выполнены с применением нитро-ВТ. Учитывая все вышесказанное, активность дегидрогеназ и диафораз определяли следующим образом. У больного забирали пять мл крови из локтевой вены в пробирку с 1мл гепарина, разведенного в 0,9 % растворе хлорида натрия (10Ед в 1мл). Из цельной крови приготовляли мазки для подсчета нейтрофилов.
Оценку результатов цитохимических реакций проводили полуколичественным методом Kaplow. В основе этого метода лежит распределение всех клеточных элементов по группам в зависимости от интенсивности окраски и количества выявляемого в клетке цитохимически активного вещества. К нулевой группе относили клетки без гранул. В первую группу включали клетки низкой степени активности, содержащие единичные гранулы, или же клетки, в которых площадь окраски занимала до 25 % цитоплазмы (степень «а»). Ко второй группе относили клетки средней степени активности, то есть те, цитоплазма которых была заполнена гранулами на 30–70 % (степень «б»). К третьей группе относили клетки высокой степени активности, то есть заполненные гранулами на 70–100 % независимо от того, контролировалось ядро или нет (степень «в»).
Для определения среднего цитохимического показателя (СЦП) в мазке подсчитывали 100 клеток (нейтрофилов или моноцитов, в зависимости от вида мазка). При этом число клеток каждой из степеней умножали на номер степени, то есть СЦП определяли по формуле: СЦП = а + 2б +3в.
Собственные данные. Вмладшей группе здоровых детей наиболее высоким был СЦП Г-6-ФДГ (86,14±0,06 у.е.). Несколько меньшей была активность ЛДГ (72,12±0,44 у72,12±0,44.е.). Самой низкой была активность СДГ (64,14±0,22 у.е.).
Качественный анализ ферментативной активности в данной возрастной группе показал, что СЦП всех исследуемых ферментов формировался за счет клеток средней степени активности (степень «б»). Клетки степеней «а» и «в» не встречались.
У детей средней возрастной группы (от 6 до 11 лет) отмечались следующие показатели активности исследуемых ферментов. Выше всего была активность анаэробного гликолиза (ЛДГ=46,30±0,28 у.е.). Несколько ниже отмечались показатели пентозо-фосфатного шунта (Г-6-ФДГ=42,22±0,22 у.е.). Самая низкая активность наблюдалась в отношении цикла Кребса (СДГ=32,22±0,24 у.е.).
Качественный анализ показал, что все реагирующие клетки были степени «б». Клетки степеней «а» и «в» не встречались.
Совершенно другая картина наблюдалась при исследовании активности ферментов в нейтрофилах старшей группы детей (12–16 лет). Все показатели активности исследуемых ферментов были значительно ниже таковых в младшей и средней группах.
Так, самая высокая активность отмечалась в отношении Г-6-ФДГ (СЦП=38,01±0,01 у.е.). Намного ниже была активность лактатдегидрогеназы (СЦП=23,01±0,02 у.е.). Самая низкая активность отмечалась в отношении СДГ (СЦП=18,02±0,02 у.е.).
При проведении качественного анализа реагирующих клеток выяснилось существенное различие между младшей и средней группами и старшей группой. Средние цитохимические показатели всех трех исследуемых ферментов в старшей группе были сформированы исключительно клетками степени «а». Клетки степеней «б» и «в» не встречались.
Литература:
- Алиева, А. А. Ферментативная активность нейтрофилов крови у больных хроническим вирусным гепатитом С в зависимости от гендерных особенностей / А. А. Алиева // Клиническая лабораторная диагностика. — 2015. — Т. 60. — № 2. — С. 33–36.
- Базарный, В. В. Цитохимическая характеристика нейтрофильных гранулоцитов при различных вариантах ишемической болезни сердца / В. В. Базарный, Е. А. Тихонина, Ю. В. Шилко // Клиническая лабораторная диагностика. — 2007. — № 8. — С. 48–49.
- Баринова, М. Э. Цитохимическая характеристика и фагоцитарная активность нейтрофилов у больных сахарным диабетом при длительно незаживающей ране стопы / М. Э. Баринова, Н. В. Свиридов, О. Н. Сулаева // Вестник неотложной и восстановительной медицины. — 2007. — Т. 8. — № 1. — С. 104–108.
- Герасимов, И. Г. Функциональная неоднородность нейтрофилов / И. Г. Герасимов // Клиническая лабораторная диагностика. — 2006. — № 2. — С. 34–36.
- Герасимов, И. Г. Субпопуляции нейтрофилов периферической крови и возможности НСТ-теста в диагностике заболеваний новорожденных / И. Г. Герасимов // Клиническая лабораторная диагностика. — 2011. — № 4. С. 42–44
- Долгушин, И. И. Секреторные функции нейтрофилов / И. И. Долгушин, А. Ю. Савочкина // Аллергология и иммунология — 2015. — Т. 16. — № 2. — С. 209–212.
- Мурзова, О. А. Клинико-цитохимические особенности течения бронхиальной астмы у детей Астраханской области: Дис… канд. мед. наук / ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия». — Астрахань, 2008. — 111 с.
- Нарциссов, Р. П. Цитохимия ферментов лейкоцитов в педиатрии: Автореф. дисс… докт. мед. наук / Р. П. Нарциссов. — Москва, 1970. — 37
