Стандартизация исследования активности фермента цитидиндезаминазы | Статья в журнале «Молодой ученый»

Отправьте статью сегодня! Журнал выйдет 4 января, печатный экземпляр отправим 8 января.

Опубликовать статью в журнале

Библиографическое описание:

Буцанец, А. В. Стандартизация исследования активности фермента цитидиндезаминазы / А. В. Буцанец, А. А. Леваненко, Н. В. Кузьмич. — Текст : непосредственный // Молодой ученый. — 2018. — № 13 (199). — С. 69-71. — URL: https://moluch.ru/archive/199/49074/ (дата обращения: 23.12.2024).



По отношению к цитидину и атипичному нуклеозиду гемцитабину, использование раствора гемцитабина для изучения активности фермента целесообразно.

Ключевые слова: цитидиндезаминаза, цитидин, гемцитабин.

Актуальность. Цитидиндезаминаза является индуктором соматических гипермутаций генов иммуноглобулинов [1]. Соматические гипермутации — это один из базовых механизмов формирования разнообразия антигенраспознающих структур иммунокомпетентных клеток [2]. Фермент обладает прямой антиретровирусной активностью при условии высокого внутриклеточного содержания рибонуклеопротеидов и свободной РНКазы [3], участвует в процессах репарации ДНК и биодеградации свободных нуклеотидов, задействован в метаболизме аминокислот. Недостаточность системы, индуцирующей соматические гипермутации, приводит к иммунодефицитам различной степени выраженности [3]. Среди методов изучения активности фермента цитидиндезаминазы значительный удельный вес по-прежнему занимают биохимические спектрофотометрические и колориметрические тесты. Индофенольная колориметрическая реакция, где в качестве субстрата используются растворы нуклеозидов, экономически выгодна и достаточно наглядно отражает уровень активности ЦДА в сыворотке крови. Потому стандартизация и повышение точности данного метода исследования может быть полезна для внедрения его в клиническую практику.

Цель: сравнение активности фермента цитидиндезаминазы по отношению к цитидину и гемцитабину.

Материалы иметоды. Растворы цитидина и гемцитабина в концентрации 21 мМоль/л, фенольно-нитропруссидный раствор — 106 мМоль/л, растворы нитропруссида натрия — 50 мг/л и 200 мг/л, раствор гипохлорита натрия в концентрации 11 ммоль/л. Сыворотки крови от 10 здоровых добровольцев. Активность цитидиндезаминазы измерялась в индофенольной колориметрической реакции по методике Giutsi со следующим соотношением реакционных компонентов: 200 мкл субстратного раствора: 20 мкл исследуемой сыворотки: 600 мкл фенольно-нитропруссидного раствора: 600 мкл основного раствора гипохлорита натрия. Инкубация проводилась при 37°C в пробирке типа Эппендорф объемом 1,5 мл в течение 22 часов. Для учета результатов использован 96-луночный планшет, иммуноферментный анализатор-мультискан. Обработка полученных данных произведена с помощью программы Microsoft Excel 2010.

Результаты работы. Цитидиндезаминаза активна в отношении большого количества минорных нуклеозидов и нуклеозидоподобных соединений [14]. Находящаяся на вершине фенольного кольца — NH2 — группа может относительно легко отрываться как в случае цитидина, так и в случае гемцитабина, что позволяет использовать раствор гемцитабина в качестве субстратного раствора при проведении индофенольной колориметрической реакции.

Основная проблема в исследованиях активности цитидиндезаминазы в плазме связана со стандартизацией нормальных показателей ферментативной активности. Есть две тенденции в интерпретации сывороточной активности цитидиндезаминазы: первая постулирует активность данного фермента как вариабельный признак, характеризующийся высокой степенью спонтанных колебаний; вторая тенденция связана с тем, что активность цитидиндезаминазы в плазме характеризуется крайне низким уровнем и любое значительное повышение имеет высокую диагностическую значимость. Выделение из общей группы здоровых добровольцев лиц только мужского пола от восемнадцати до двадцати пяти лет делалось с целью ввести оптимальный уровень активности ЦДА.

По результатам исследования значения активности ЦДА в отношении цитидина и гемцитабина сопоставимы (таблица 1).

Таблица 1

Оптическая плотность растворов после инкубации иактивность ЦДА вреакциях дезаминирования цитидина игемцитабина

Номер образца

Показатели оптической плотности после реакции сцитидином

Активность вреакции сраствором цитидина,

МЕ/л

Показатели оптической плотности после реакции сгемцитабином

Активность вреакции сраствором гемцитабина, МЕ/л

1

0,094

0,34

0,144

0,63

2

0,103

0,58

0,122

0,84

3

0,101

0, 53

0,117

0,71

4

0,107

0,69

0,155

1,72

5

0,105

0,63

0,133

1,14

6

0,089

0,21

0,095

0,13

7

0,104

0,61

0,118

0,74

8

0,102

0,55

0,106

0,42

9

0,107

0,69

0,102

0,32

10

0,092

0,53

0,091

0,73

Среднее

значение, (M±m)

0,10±0,02

0,54±0,05

0,12±0,01

0,74±0,14

Показатели оптической плотности при реакции с гемцитабином достоверно отличаются от таковых со стандартным раствором цитидина (p<0,05). Показатели оптической плотности в индофенольной колориметрической реакции после 22-ти часовой инкубации для цитидина и гемцитабина показали слабую положительную корреляцию с коэффициентом регрессии R=0,64, что может быть объяснено малым объемом выборки (рисунок 1).

Рис.1. Связь между значениями оптической плотности в индофенольной колориметрической реакции при использовании цитидина и гемцитабина в качестве субстратов

Выводы

  1. Использование атипичного нуклеозида — гемцитабина — целесообразно для определения активности цитидиндезаминазы.

Литература:

  1. Дашкевич, А. М. Безопасность и эффективность вакцины «Флюваксин» при иммунизации военнослужащих / А. М. Дашкевич и др. // Здравоохранение, 2011. –2011. — № 12 — C. 36–40.
  2. Павлов, К. И. Цитидиндезаминаза и аденозиндезаминаза — ферменты, контролирующие интенсивность и специфичность иммунного ответа: стандартизация активности в норме и диагностическая значимость при заболеваниях / К. И. Павлов, Л. П. Титов, А. Е. Гончаров, О. А. Янович, С. В. Жаворонок // Медицинский журнал — 2014. — № 4.
  3. Selection of the best blood compartment to measure cytidine deaminase activity to stratify for optimal gemcitabine or cytarabine treatment / G. J.Peters, R. J. Honeywell, M. Maulandi // Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids–2014 — № 33 — C. 403–412.
Основные термины (генерируются автоматически): колориметрическая реакция, оптическая плотность, активность, раствор, субстратный раствор, сыворотка крови.


Ключевые слова

цитидиндезаминаза, цитидин, гемцитабин

Похожие статьи

Синтез новых гетероциклических аналогов колхицина, проявляющих высокую антипролиферативную активность

В статье авторы описывают синтез новых производных колхицина и приводят данные об их антипролиферативной активности.

Возрастная динамика свободнорадикальных процессов у самцов крыс при введении антиоксидантов и в условиях стресса

Исследованы особенности свободнорадикальных процессов в условиях иммобилизационного стресса, введения α-токоферола, эмоксипина и циклоферона, а также их сочетанного воздействия. В результате исследования установлено, что под действием иммобилизационн...

Гепатопротекторные свойства чернушки посевной (Nigella sativa)

Проведена сравнительная оценка клинической эффективности применения препаратов Эссенциале и Чернушки посевной (Nigella sativa) у 16 пациентов, группы риска. Для профилактики и лечения различных заболеваний печени все шире используются природные гепат...

Потенциальная биологическая активность комплексов на основе замещённых пиразинов

Был проведен анализ биологической активности комплекса меди с замещенным пиразином с помощью программы PASS (Prediction of Activity Spectrafor Substances).

Синтез медного комплекса фталоцианина на основе 5-гидроксихинолиновой кислоты

В статье описан способ синтеза медного комплекса фталоцианина на основе 5-гидроксихинолиновой кислоты, исходным сырьём для синтеза являлся хинолин. Результатом работы является сдвиг полосы поглощения полученного соединения в более длинноволновую обла...

Влияние бактериального полисахарида и полиэлектролита на иммуногенные свойства эшерихиозного анатоксина

Исследования показали, что использование пирогенала и полиакриловой кислоты в качестве адъювантов в должной мере повышают иммуногенность эшерихиозного анатоксина, выражающуюся более активной выработкой антитоксических антител. Установлено, что наибол...

Некоторые аспекты антиагрегантной и антикоагулянтной активности икариина в условиях экспериментальной цереброваскулярной патологии ишемического генеза

Проведено исследование, посвященное изучение антиагрегантных и антикоагулянтных свойств икариина в условиях ишемии головного мозга. В результате установлено, что икариин обладает незначительным антиагрегантным и антикоагулянтным потенциалом и уступае...

Цитохимическая активность моноцитов крови у больных с серопозитивным ревматоидным артритом

Изучалась цитохимическая активность моноцитов крови у больных серопозитивным ревматоидным артритом (РА). В динамике исследовались следующие ферменты: сукцинатдегидрогеназа (СДГ), лактатдегидрогеназа (ЛДГ), глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа (Г-6-ФДГ). Пок...

Влияние туркестерона и экдистерона на развитие активности альфа-амилазы у растущих крыс

Изучение и синтез лекарственных веществ на основе модификации природных соединений

Целью настоящего исследования был синтез новых азометиновых производных госсипола с ароматическими аминосоединениями, и перевод этих азометинов в водорастворимое состояние.

Похожие статьи

Синтез новых гетероциклических аналогов колхицина, проявляющих высокую антипролиферативную активность

В статье авторы описывают синтез новых производных колхицина и приводят данные об их антипролиферативной активности.

Возрастная динамика свободнорадикальных процессов у самцов крыс при введении антиоксидантов и в условиях стресса

Исследованы особенности свободнорадикальных процессов в условиях иммобилизационного стресса, введения α-токоферола, эмоксипина и циклоферона, а также их сочетанного воздействия. В результате исследования установлено, что под действием иммобилизационн...

Гепатопротекторные свойства чернушки посевной (Nigella sativa)

Проведена сравнительная оценка клинической эффективности применения препаратов Эссенциале и Чернушки посевной (Nigella sativa) у 16 пациентов, группы риска. Для профилактики и лечения различных заболеваний печени все шире используются природные гепат...

Потенциальная биологическая активность комплексов на основе замещённых пиразинов

Был проведен анализ биологической активности комплекса меди с замещенным пиразином с помощью программы PASS (Prediction of Activity Spectrafor Substances).

Синтез медного комплекса фталоцианина на основе 5-гидроксихинолиновой кислоты

В статье описан способ синтеза медного комплекса фталоцианина на основе 5-гидроксихинолиновой кислоты, исходным сырьём для синтеза являлся хинолин. Результатом работы является сдвиг полосы поглощения полученного соединения в более длинноволновую обла...

Влияние бактериального полисахарида и полиэлектролита на иммуногенные свойства эшерихиозного анатоксина

Исследования показали, что использование пирогенала и полиакриловой кислоты в качестве адъювантов в должной мере повышают иммуногенность эшерихиозного анатоксина, выражающуюся более активной выработкой антитоксических антител. Установлено, что наибол...

Некоторые аспекты антиагрегантной и антикоагулянтной активности икариина в условиях экспериментальной цереброваскулярной патологии ишемического генеза

Проведено исследование, посвященное изучение антиагрегантных и антикоагулянтных свойств икариина в условиях ишемии головного мозга. В результате установлено, что икариин обладает незначительным антиагрегантным и антикоагулянтным потенциалом и уступае...

Цитохимическая активность моноцитов крови у больных с серопозитивным ревматоидным артритом

Изучалась цитохимическая активность моноцитов крови у больных серопозитивным ревматоидным артритом (РА). В динамике исследовались следующие ферменты: сукцинатдегидрогеназа (СДГ), лактатдегидрогеназа (ЛДГ), глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа (Г-6-ФДГ). Пок...

Влияние туркестерона и экдистерона на развитие активности альфа-амилазы у растущих крыс

Изучение и синтез лекарственных веществ на основе модификации природных соединений

Целью настоящего исследования был синтез новых азометиновых производных госсипола с ароматическими аминосоединениями, и перевод этих азометинов в водорастворимое состояние.

Задать вопрос