Авторы: Абаралиев А. К., Сооданбекова А. С.

Рубрика: Спецвыпуск

Опубликовано в Молодой учёный №20 (124) октябрь-2 2016 г.

Дата публикации: 26.10.2016

Библиографическое описание:

Абаралиев А. К., Сооданбекова А. С. Морфофункциональное состояние и стероидогенный потенциал тестикулярной ткани при криоконсервации // Молодой ученый. — 2016. — №20.1. — С. 1-3.



Представлены результатыэкспериментальных исследований криозаморозки половых гонад. При криоконсервации фрагментов тестикулярной ткани кроликов, с использованием разработанной нами криопротектора на основе глицерина и программного замораживания наблюдалась морфофункциональная сохранность и стероидогенный потенциал фрагментов тестисов.

Results of pilot studies of cryofreezing of sexual gonads are presented. At a cryopreservation of fragments of the testicular tissue of rabbits, with use developed by us a cryoprotector on the basis of glycerin and program freezing morphfunktsionaly safety and steroidogen potential of fragments of testis was observed.

Ключевые слова: криоконсервация, тестикулярная ткань, сперматогенез.

Keywords: cryopreservation, testicular tissue, spermatogenesis.

Введение. Одним из основных задач современной андрологии является сохранение и поддержание фертильности. Сперматогенный эпителий семенников крайне чувствителен к повреждающим факторам, в результате их воздействия, приводящие к ослаблению или прекращению сперматогенеза и атрофии эпителия.

Криоконсервация ткани и клеток мужских половых гонад в настоящее время является одним из прогрессивных методов сохранения фертильности. При различных патологических состояниях организма или длительной гормональной, лучевой и химиотерапии криоконсервация тестикулярной ткани позволяет значительно сохранить стероидогенный и сперматогенный потенциалы биологического материала, как объекта для дальнейшей трансплантации.

Цель исследования — изучить морфофункциональное состояние, стероидогенный и сперматогенный потенциалы криоконсервированной тестикулярной ткани.

Материалы иметоды исследования.

Материалом исследования служили фрагменты тестикулярной ткани от здоровых кроликов-самцов, половозрелого возраста с живой массой 3000–3500 г. После экстирпации семенники освобождали от оболочки и вырезали фрагменты 0,5–1см2. Исследуемый материал был разделен на следующие экспериментальные группы:

I группа — контроль, тестикулярную ткань после вырезки фиксировали в 10 % нейтральном парафине;

II группа — фрагменты тестикулярной ткани криоконсервировали без добавления криопротектора, тем самым вызывали искусственное повреждение клеток;

III группа — тестикулярную ткань замораживали с добавлением криопротектора, в качестве криопротектора использовали смесь с 10 % глицерином.

Работу проводили в соответствии с положением «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей» (Страсбург, 1985).

Для заморозки использовали крипробирки, объем замораживаемого образца составлял 1 мл. Образцы замораживали на программном замораживателе CryoLogic с использованием программы CryoGenesis 4. Размораживали образцы на водяной бане при температуре 34–370С.

Для гистологического исследования фрагменты яичек фиксировали в 10 % нейтральном формалине, обезвоживали в спиртах восходящей концентрации, заливали в парафин и просветляли в ксилоле. На санном микротоме готовились срезы толщиной 6–7 микрон и окрашивали гематоксилином и эозином.

Результаты иобсуждения.

При морфологическом исследовании тестикулярной ткани контрольной I группы — паренхима состоит из извитых семенных канальцев, в строме находиться небольшое количество соединительной ткани, а также группы интерстициальных клеток (клетки Лейдига). Извитые семенные канальца выстланы сперматогенным эпителием. На базальной области находятся крупные клетки с гиперхромными ядрами — сперматогонии. Между ними располагаются клетки пирамидальной формы и вытянутые в просвет канальца — клетки Сертоли. Клетки Сертоли выполняют несколько существенных функций: выполняют барьерную функцию между половыми клетками и внутренней средой организма; обеспечивают питание половых клеток; участвует в образовании высокоспециализированной внутриканальцевой жидкости, обладающая фагоцитарной активностью и удаляющая дегенерированные и остаточные тельца. В базальной области обнаруживаются делящиеся митотическим образом сперматогонии, ближе к просвету канальцев в адлюминальной области определяются спрематоциты I и II порядков, за ними находятся сперматиды на различных этапах развития и зрелые сперматозоиды (рис 1. а, б).

C:\Users\User\Desktop\кролики статья\контроль\100_1357.JPGC:\Users\User\Desktop\кролики статья\контроль\100_1359.JPG

а)б)

Рис 1. Извтые семенные канальца кроликов I группы.

Видны поперечные и косые срезы извитых семенных канальцев разделенных соединительной тканью, а также группы интерстициальных клеток. Видны клетки находящиеся на всех стадиях сперматогенеза. Окраска гематоксилином и эозином. х 120, 480.

При морфологическом анализе II группы, криоконсервация без криопротектора, наблюдаются деструктивные изменения сперматогенного эпителия, выражяющиеся в хаотичности расположения клеток, разобщенности структур, семенные канальца не проявляются. Отмечаются набухщие сперматоциты первого и второго порядка. Клетки Сертоли плохо определяются. В строме отмечается отек паренхимы которая обусловлена нарушенем проницаемости. Видны интерстициальные клетки с пикнотическими ядрами (рис 2 а, б,).

C:\Users\User\Desktop\кролики статья\вода 1\100_1421.JPGC:\Users\User\Desktop\кролики статья\вода 1\100_1420.JPG

а)б)

Рис 2. Извитые семенные канальца кроликов II группы. Окраска гематоксилином и эозином. Х 120, 480.

В III экмпериментальной группе исследования с использованием в качестве криопротектора 10 % глицерина и заморозки с помощью програмного замораживателя CryoLogic наблюдается общая сохранность морфологических структур сперматогенного эпителия схожая с I группой. Отмечаются клетки соответсвующие всем стадиям сперматогенеза, видна сохранность клеток Сертоли и сперматогенного эпителия.

C:\Users\User\AppData\Local\Microsoft\Windows\Temporary Internet Files\Content.Word\100_1362.jpgC:\Users\User\AppData\Local\Microsoft\Windows\Temporary Internet Files\Content.Word\100_1323.jpg

а)б)

Рис 3. Извитые семенные канальца кроликов III группы. Окраска гематоксилином и эозином. Х 120, 480.

Выводы.

При криоконсервации тестикулярной ткани с использованием 10 % глицерина и программного замораживателя наблюдается хорошая морфофункциональная сохранность и способностью к синтезу и секреции половых стероидов по сравнению с нативной тестикулярной тканью. Биологический материал фрагментов тестикулярной ткани криоконсервированный таким образом может быть использован в дальнейшем использован для коррекции и восстановлении фертильности.

Литература:

  1. Гистология/ под ред. Э. Г. Улумбекова, Ю. А. Челышева.-М.: ГЭОТАР, 1997.- 960 с.
  2. Ендовицкая И. П., Зиновьева Н. А., Эрнст Л. К. Динамика сперматогенеза у кроликов// Цитология.-2005.-Т.47.-С.44–48.
  3. Киселева А. Ф., Житников А, Я., Кейсевич Л. В. Морфофункциональные методы исследования в норме и патологии.-Киев: Здоровье, 1983.- С.164.
  4. Сперматогенез и его регуляция// Под ред. Л. В. Данилова.- М.: Наука, 1983.-С.232.
Основные термины (генерируются автоматически): тестикулярной ткани, фрагменты тестикулярной ткани, фрагментов тестикулярной ткани, тестикулярной ткани кроликов, сперматогенного эпителия, криоконсервация тестикулярной ткани, потенциал тестикулярной ткани, криоконсервации тестикулярной ткани, криоконсервированной тестикулярной ткани, тестикулярной ткани контрольной, тестикулярной ткани криоконсервированный, половых гонад, of fragments, fragments of, нативной тестикулярной тканью, морфофункциональная сохранность, testicular tissue of, pilot studies of, сохранность клеток Сертоли, cryopreservation of fragments.

Обсуждение

Социальные комментарии Cackle