В рамках конференции «Иммунологические чтения в г. Челябинске» и школы «Проточная цитометрия в клинической лабораторной диагностике» читаются лекции и ведутся практические занятия на самых современных проборах и обурудовании с использованием последних достижений клеточной иммунологии. Занятия посвящены современному представлению о проточной цитометрии, иммунодиагностике и иммунотерапии.
Ключевые слова: конференция, школа, биотехнология, цитометрия.
На базе кафедры прикладной биотехнологии Южно-Уральского государственного университета на протяжении многих лет проводится международная школа по проточной цитометрии. В организационных моментах школы активно участвуют студенты и аспиранты.
В 2014 году будет проводиться уже IХ Всероссийская конференция с международным участием «Иммунологические чтения в г. Челябинске» и Международная школа «Проточная цитометрия в клинической лабораторной диагностике».
Конференция и школа проводится для специалистов в области клинической лабораторной диагностики, аллергологов и клинических иммунологов, а также врачей других специальностей, научных сотрудников, аспирантов, ординаторов и студентов. При этом в рамках конференции и школы читаются лекции и ведутся практические занятия на самых современных проборах и оборудовании с использованием последних достижений клеточной иммунологии. Занятия посвящены современному представлению о проточной цитометрии, иммунодиагностике и иммунотерапии. Лекции читают ведущие специалисты России, а также иностранные специалисты из США, Швейцарии и Франции.
В программе школы предусмотрены 4 направления обучения:
- Лекции ведущих специалистов по фундаментальной и клинической иммунологии;
- Практические занятия и семинары по работе на проточных цитометрах компании Beckman Coulter Navios и FC-500;
- Клинические разборы типичных и спорных случаев;
- Электронный класс по обучению различным вариантам работы с программным обеспечением современных проточных цитометров.
В организации проведения данного мероприятия участвуют различные зарубежные и российские партнеры ООО «Бекмен Культер» — представительство компании Beckman Coulter (США) в России и СНГ, Москва, ООО «ЛабТэк Лтд», Санкт-Петербург, компания БИО-РАД (США), ООО Хеликон (Москва) и другие.
Данные компании обеспечивают материально-техническую базу данного мероприятия и качество преподносимого материала. Такое взаимодействие позволяет предоставлять самые последние достижения в клеточных технологиях и проводить занятия на самом высоком технологическом уровне.
Проведение таких школ уже в настоящее время позволило значительно расширить спектр исследований в различных городах России по клеточным технологиям. На базе нашей школы прошли обучение более 500 специалистов из 80 городов России и ближнего зарубежья — Украины, Казахстана, Узбекистана, Белоруссии, Киргизии. Все это позволило не только расширить представление о современных технологиях, но создать основу для стандартизации исследований в различных регионах.
Именно стандартизованной технологии оценки иммунных статусов и будет посвящена ближайшая школа по проточной цитометрии в Челябинске [1–5].
Все это позволит в ближайшем будущем унифицировать методы исследований, а значит, объективно их сопоставлять, не зависимо от регионов, где выполнены данные протоколы анализов.
Помимо этого одной из важнейших задач школы является расширение знаний о возможностях проточной цитометрии для самых различных областей знаний.
Основой для проточной цитометрии явилось применение моноклональных антитет для анализа поверхностных структур клеток. Использование МА революционизировало подходы к типированию клеток. В настоящее время большинство клинических применений проточной цитофлюориметрии выполняется именно с их помощью. Меченые флуорохромами МА позволяют проводить как качественный, так и количественный анализ поверхностных и внутриклеточных антигенов. На сегодняшний день ряд фирм предлагают широкий спектр МА, позволяющих определять поверхностные антигены или кластеры дифференцировки лейкоцитов человека. Эти МА используются для типирования лейкемий и опухолей, определения аутоиммунных и иммунодефицитных заболеваний, исследования активации Т-, В-клеток, натуральных киллеров и моноцитов/макрофагов и др.
Кроме этого, последние достижения в области флуоресцентных красителей позволяют значительно повысить информативность получаемых результатов. Так, использование несколько МА, меченых различными флуоресцентными красителями, позволяет в одном эксперименте получать информацию сразу о нескольких антигенах на поверхности клеток и, как следствие этого, дает возможность исследователю судить о субпопуляционном составе клеток и наличии различных аномалий, а также об активности клеток внутри одной субпопуляции. Первые работы подобного рода датируются началом 70-ых годов ХХ века, когда появились первые цитофлуориметры, оснащенные аргоновыми и криптоновыми лазерами, что позволило одновременно детектировать красители, содержащие флуоресцеин и родамин. Однако уже в начале 80-ых годов с появлением твердотельных лазеров к спектру применяемых флурохромов был добавлен абсолютно новый класс соединений — фикобилины. Фикобилины являются хромофорной группой фикобилипротеинов — кислых водорастворимых глобулярных хромопротеинов билисом светособирающего комплекса фотосинтетических структур водорослей и цианобактерий. К этой группе соединений относятся фикоэритрин (РЕ) и аллофикоцианин (АРС). Уже в конце 80-ых годов на основе РЕ были созданы новые красители, состоящие из двух соединенных вместе флуоресцентных молекул и получивших наименование «тандемных» красителей. К их числу относятся PE-Texas Red, PE-Cy5, PE-Cy5.5, PE-Cy7 и некоторые другие. Появление этих красителей позволило на приборах, оснащенных только голубым лазером, анализировать до 5 флуоресцентных параметров одновременно. В 90-ые годы появляются новые тандемные красители для красного лазера, синтезированные на основе АРС, и первым из них был АРС-С7. Одновременно появляются первые синтетические красители семейства Alexa Fluor. В отличие от перечисленных выше органических красителей, представите этой группы флуорохромов отличает большая стабильность и яркость, при этом интенсивность флуоресценции находится в меньшей зависимости от уровня рН среды. Благодаря этому широкому кругу исследователей становится доступным многоцветный анализ c использованием антител, конъюгированных с флуорохромами, для возбуждаются которых применяются лазеры с длинами волн 407, 488 и 595 нм, что позволяет, помимо параметров прямого и бокового светорассеяния, оценивать уровень связывания 8 антител в одной пробирке. С применением этих технологий были достигнуты существенные успехи в исследование субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови и лимфоидных органов человека и лабораторных животных.
Все новые и новые достижения в различных областях молекулярной биологии, биохимии и медицины позволяют изучать при помощи проточной цитофлюориметрии различные аспекты биологии клетки, такие как содержание секретируемых цитокинов в сыворотке при помощи мультиплексного анализа, локализацию антиген-специфических клонов клеток при помощи тетрамеров и многое другое.
Очень важным разделом для биологии и медицины при появлении новых методик исследования является формирование нормативных показателей. Не является исключением и проточная цитометрия. Остается открытым вопрос о Российских нормах, связанных с региональными особенностями отдельных областей. Все это требует объединения усилий различных лабораторных коллективов в проведении исследований в данном направлении.
На школе предусмотрено распространение методической литературы по самым последним достижениям проточной цитометрии. Список методической литературы для обучения специалистов прилагается.
Данная школа является одним из новых учебных подходов к формированию специалистом на необходимом технологическом и инновационном уровне.
Литература:
1. Зурочка А. В., Черешнев В. А., Усова Ю. А.. Базофилы. Латентная сенсибилизация. Екатеринбург: УрО РАН. 2012. 136 с.
2. Зурочка А. В., Хайдуков С. В., Кудрявцев И. В., Черешнев В. А.. Проточная цитометрия в медицине и биологии. Екатеринбург: РИО УрО РАН. 2013. 552 с.
3. Кудрявцев И. В., Хайдуков С. В., Зурочка А. В., Черешнев В. А.. Проточная цитометрия в экспериментальной биологии/ Екатеринбург: УрО РАН.- 2012.- 192 с.
4. Хайдуков С. В., Л. А. Байдун, А. В. Зурочка, А. А. Тотолян. Стандартизованная технология «Исследование субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови с применением проточных цитофлюориметров-анализаторов». Стандартизация аналитических технологий лабораторной медицины. Выпуск 2. Под ред. В. В. Меньшикова. М.: Медицина. С.8–39. Приложение к журналу «Клиническая лабораторная диагностика» № 7. 2013
5. Хайдуков С. В., Зурочка А. В., Черешнев В. А. Цитометрический анализ в клинической иммунологии Екатеринбург: УрО РАН. 2011. 220 с.
