Перитонит, несмотря на клинические успехи, по-прежнему сопровождается высокой летальностью вследствие развивающихся сепсиса и эндотоксинемии, а механизмы развития перитонита остаются до конца не изученными. Проведенные за последнее десятилетие исследования показали, что своевременная и качественная очистка крови от эндотоксинов, коррекция развивающейся дислипидемии в значительной степени зависят от детоксикационной и эндотоксинэлиминирующей функций печени [1].

Цель исследования — выяснить особенности изменения температуры тела, тиреоидного статуса, липопротеидов крови, активности аргиназы, NOх и детоксикационной функции печени у крыс с экспериментальным перитонитом.

Опыты выполнены на 108 взрослых белых крысах обоего пола массой 180–220 г. Для создания экспериментального перитонита использована модель лигирования и последующего однократного пунктирования слепой кишки — CLP (cecal ligation and puncture) [3]. Для этого крысам под гексеналовым наркозом (100 мг/кг, внутрибрюшинно) производили двухсантиметровый разрез передней брюшной стенки, через который извлекали слепую кишку. Затем ниже илеоцекального клапана на кишку накладывали лигатуру и однократно пунктировали ее иглой с внешним диаметром 1,3 мм (18 gauge). Пассаж пищевых масс при этом не нарушался. По данным литературы, через 18–24 ч после CLP-операции у животных развивается тяжелый полимикробный сепсис, который сопровождается выраженной полиорганной недостаточностью. В качестве контроля использовали ложнооперированных (ЛО) крыс, которым под наркозом проводили разрез передней брюшной стенки без извлечения и пунктирования слепой кишки. Декапитацию животных проводили через 24 ч после лигирования и пунктирования слепой кишки или ЛО. Взятие для исследования крови у животных проводилось за максимально короткое время после декапитации.

Схематическое изображение CLP-операции у крыс представлено на рисунке 1.

Рис. 1. Схематическое изображение CLP-операции у крыс: a — выполнен продольный разрез брюшной стенки; b — осуществлено извлечение слепой кишки и ниже илеоцекального клапана наложена лигатура; с — выполнено однократное пунктирование слепой кишки иглой; d — возвращена слепая кишка в брюшную полость и осуществлено ушивание брюшной стенки

Суммарную фракцию липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП) и ЛПНП из сыворотки крови выделяли путем осаждения по методу М. Burstein и J. Samaille. Для определения содержания общего ХС, ХС ЛПВП в сыворотке крови и ХС в тканевых гомогенатах проводили экстракцию липидов по методу М. А. Креховой, М. К. Чехрановой. Содержание ХС в сухих липидных экстрактах сыворотки крови оценивали с помощью реакции Либермана-Бурхарда, а содержание ХС суммарной фракции ЛПОНП + ЛПНП — по формуле ХС ЛПОНП + ЛПНП = общий ХС сыворотки крови — ХС ЛПВП. Коэффициент атерогенности (Ка) рассчитывали по следующей формуле: Ка = (ХС ЛПОНП + ЛПНП) / ХС ЛПВП.

Продукцию NO оценивали по суммарному уровню в плазме крови нитратов/нитритов (NO _x ). Содержание общего и свободного трийодтиронина (Т ₃ ) и тироксина (Т ₄ ) в плазме крови определяли радиоиммунологическим методом с использованием наборов реактивов РИА-Т ₃ -СТ, РИА-Т ₃ -свободный-СТ, РИА-Т ₄ -СТ и РИА-Т ₄ -свободный производства УП «ХОП ИБОХ НАН Беларуси». Тяжесть поражения печени оценивали по изменению соотношения активности АлАТ и АсАТ (АлАТ/АсАТ) в сыворотке крови. Активность АлАТ и АсАТ в плазме крови определяли колориметрическим динитрофенилгидрозиновым методом. Активность аргиназы печени определяли спектрофотометрически по методике, предложенной J. W. Geyerи, B. Dabich. О детоксикационной функции печени, степени эндогенной интоксикации судили по продолжительности наркотического сна (ПНС), концентрации в плазме крови фракции «средних молекул» (СМ) и степени токсичности крови (СТК). Определение содержания СМ производили методом кислотно-этанольного осаждения, разработанным В. М. Моиным с соавт., СТК-способом, предложенным О. А. Радьковой с соавт. О ПНС у крыс (гексенал 100,0 мг/кг, в/б) судили по времени нахождения животных в боковом положении.

У всех животных с помощью электротермометра ТПЭМ-1 (НПО «Медфизприбор», Российская Федерация) измеряли ректальную температуру.

В исследовании использовались следующие экспериментальные группы: Интактные ( n = 18) — интактные крысы; ЛО ( n = 18) — ложнооперированные крысы, которым под наркозом проводили разрез передней брюшной стенки без извлечения и пунктирования слепой кишки; CLP-перитонит ( n = 27) — крысы, которым выполняли CLP-операцию. В группе CLP-перитонит через 24 ч после CLP-операции отмечалась 66,7 % выживаемость животных.

Полученные цифровые данные обрабатывали общепринятыми методами вариационной статистики с помощью критерия Стьюдента. Все данные представляли в виде среднего арифметического и стандартной ошибки среднего арифметического (Х ± Sx). Статистически достоверными считали различия при р < 0,05.

В условиях экспериментального перитонита у крыс через 24 ч после CLP-операции происходит развитие гипотиреоидного состояния, вторичной атерогенной дислипидемии, снижение температуры тела, активности аргиназы и детоксикационной функции печени, а также повышение уровня NO _x в плазме крови. У животных после CLP-перитонита в сравнении с ЛО повышаются активности АлАТ и АсАТ в сыворотке крови на 183,9 % ( р < 0,001) и 33,8 % ( р < 0,05) соответственно, уровень NO _х в плазме крови на 72,3 % ( р < 0,01), содержание общего ХС в печени и сыворотке крови на 37,2 % ( р < 0,01) и 23,7 % ( р < 0,05) соответственно, содержание ХС ЛПОНП + ЛПНП в сыворотке крови на 88,8 % ( р < 0,001), Ка на 185,8 % ( р < 0,001), СТК на 125,2 % ( р < 0,001), уровень СМ в плазме крови на 70,0 % ( р < 0,001) и увеличивается ПНС на 43,4 % ( р < 0,05), вместе с тем снижается активность аргиназы печени на 36,3 % ( р < 0,01), содержание ХС ЛПВП в сыворотке крови на 42,4 % ( р < 0,01), уровень йодсодержащих гормонов в плазме крови (Т ₃ — на 30,5 % ( р < 0,05), сТ ₃ — на 34,0 % ( р < 0,05), Т ₄ — на 31,4 % ( р < 0,01) и сТ ₄ — на 33,2 % ( р < 0,001)), соотношение активности АсАТ/АлАТ на 53,6 % ( р < 0,01) и температура тела на 1,1 °С ( р < 0,001).

Полученные данные свидетельствуют о том, что у крыс в условиях CLP-перитонита происходит развитие гипотиреоидного состояния, формирование вторичной атерогенной дислипопротеинемии, снижение температуры тела, а также отмечаются признаки поражения печени. Вместе с тем, есть основания полагать, что активность аргиназы и детоксикационной функции печени, а также уровень NO _х в крови могут иметь значение в формировании тиреоидного статуса и вторичной атерогенной дислипидемии при экспериментальном перитоните, вызываемом CLP-операцией.

Литература:

1. Hotchkiss, R. S. The pathophysiology and treatment of sepsis / R. S. Hotchkiss, I. E. Karl // N. Engl. J. Med. — 2003. — Vol. 348, N 2. — P. 138–150.
2. Висмонт, Ф. И. Эндотоксинемия, дисрегуляция и формирование предболезни / Ф. И. Висмонт // Вес. Нац. акад. наук Беларуси. Сер. мед. наук. — 2018. — Т. 15, № 1. — С. 7–16.
3. Моделирование экспериментального сепсиса путем выполнения лигирования и пункции слепой кишки (CLP-процедура) / Е. Ю. Шаповалова [и др.] // Ульянов. мед.-биол. журн. — 2020. — № 3. — С. 150–158.