Сальмонеллез — острое инфекционное зооантропонозное заболевание с фекально-оральным механизмом передачи, вызываемое Salmonella spp., характеризующееся симптомами общей интоксикации и поражением ЖКТ, в редких случаях развитием генерализованных форм.
Бактерии рода сальмонелла являются одной из основных причин ОКИ бактериальной этиологии у жителей как развивающихся, так и развитых стран, за короткое время в мире заболеваемость увеличилась в 6–10 раз. В большинстве стран сальмонеллы занимают первое — второе место в структуре инвазивных диарей [1].
Заболеваемость сальмонеллезом носит спорадический характер, но также регистрируются крупные пищевые, реже водные вспышки, очаги нозокомиальной инфекции (родильные дома, реанимационные отделения, отделения для детей раннего возраста) и вспышки в закрытых учреждениях (дома престарелых, психоневрологические интернаты). Наиболее высокая заболеваемость сальмонеллезом характерна для детей раннего и дошкольного возраста. Источником инфекции при сальмонеллезе являются животные и человек (больные и бактерионосители), причем большую опасность представляют животные бактериовыделители. Инфицирующая доза 105–108 микробных клеток. Иммунитет после перенесенной инфекции нестойкий (3–6 месяцев), сероспецефический.
Сальмонеллы, как грамотрицательные микроорганизмы, обладают природной чувствительностью к широкому спектру АБП: бета-лактамам (аминопенициллины, карбоксипенициллины, ингибиторзащищенные пенициллины, цефалоспорины, монобактамы, карбапенемы), аминогликозидам (стрептомицин, канамицин, гентамицин, тобрамицин, амикацин), хинолонам (налидиксовая кислота) и фторхинолонам (ципрофлоксацин, норфлоксацин, офлоксацин и др.), тетрациклинам (тетрациклин, доксициклин), полимиксинам, сульфаниламидам и ко-тримоксазолу, нитрофуранам (нифуроксазид, нифурантел, фуразолидон) и препаратам других групп (фосфомицину, хлорамфениколу) [2]. Поскольку в настоящее время отмечен неуклонный рост резистентности штаммов энтеробактерий к большинству препаратов, применяющихся для терапии инфекционных заболеваний, у выделенных возбудителей необходимо в обязательном порядке определять чувствительность к АБП не только с целью назначения адекватной этиотропной терапии, но и с целью осуществления мониторинга чувствительности к различным АБП.
Материалы и методы
Исследование проводили на базе лаборатории ООО НПФ Хеликс отдела микробиологии в период с февраля 2022 г. по май 2022 г. Первоначально для проведения исследования были получены 40 образцов чистой культуры Salmonella enteritidis (group D) от 40 пациентов с ОКИ в возрасте до 16 лет в соответствии с Методическими рекомендациями [3,4]. Далее проводилось определение чувствительности к выбранным АБ и статистическая обработка результатов [5].
На первом этапе исследования производили первичный посев биологического материала на плотные среды Эндо и XLD и среду обогащения Раппапорта. Через 24 часа отбирали колонии, подозрительные на сальмонеллы. Эти колонии в количестве 3–5 и более с каждой чашки пересевали на среду Олькеницкого. В лаборатории Хеликс для идентификации подозрительных колоний проводят постановку на масс-спектрометр Maldi Biotyper Microflex. В этот же день производили пересев со среды Раппапорта на среду XLD и инкубировали 24 часа при температуре 37℃.
Через 48 часов проводилась идентификация выделенных культур по морфологическим и культурально-биохимическим свойствам, изучение антигенной структуры выделенных культур в реакции агглютинации на стекле с монорецепторными сальмонеллезными сыворотками, просмотр чашек с посевами со сред обогащения и отбор подозрительных колоний.
Если выделенная культура обладала типичными для сальмонелл морфологическими, культуральными и биохимическими свойствами и давала четкие результаты в реакции агглютинации с определенными монорецепторными сыворотками, начиналось определение чувствительности сальмонеллы к антибиотикам. При выделении сальмонелл, отклоняющихся от типичной характеристики, проводились дополнительные исследования для окончательной идентификации и дальнейший подбор чувствительности.
Далее начинался второй этап исследования. Диско-диффузионный метод (ДДМ) определения чувствительности микроорганизмов к АБП основан на способности АБП диффундировать из пропитанных ими бумажных дисков в питательную среду, угнетая рост микроорганизмов, посеянных на поверхности агара [6]. Для исследования в качестве питательной среды использовали агар Мюллера-Хинтона собственного приготовления и диски со следующими антибиотиками: амикацин, цефотаксим, амоксициллин-клавулан, ампициллин-сульбактам, сульфаметоксазол-триметоприм, цефтибутен. При определении чувствительности ДДМ использовали стандартный инокулюм, соответствующий по плотности 0,5 по стандарту Мак-Фарланда и содержащий примерно 1,5x108 КОЕ/мл. Непосредственно после аппликации дисков чашки Петри помещали в термостат кверху дном и инкубировали при температуре 37°C в течение 24 часов. Учет результатов проводился с помощью анализатора чувствительности к антибиотикам ADAGIO. Результаты вносили в итоговую таблицу. Результаты измерения диаметров зоны подавления роста при определении чувствительности Salmonella enteritidis (group D) на агаре МХ представлены в табл. 1.
Таблица 1
Результаты измерения диаметров зоны подавления роста при определении чувствительности Salmonella enteritidis (group D) на агаре МХ
|
Образец |
Зона задержки роста, мм |
|||||
|
Амикацин, 30 мкг |
Цефотаксим, 5 мкг |
Амоксициллин-клавулан , 20мкг+10мкг |
Ампициллин-сульбактам, 10мкг+10мкг |
Сульфаметоксазол-триметоприм 1,25мкг+23,75 мкг |
Цефтибутен, 30 мкг |
|
|
1 |
19 |
22 |
22 |
20 |
6 |
28 |
|
2 |
18 |
20 |
23 |
17 |
10 |
23 |
|
3 |
19 |
20 |
21 |
19 |
8 |
24 |
|
4 |
20 |
24 |
25 |
24 |
8 |
30 |
|
5 |
20 |
25 |
27 |
26 |
9 |
33 |
|
6 |
19 |
24 |
26 |
26 |
9 |
28 |
|
7 |
18 |
24 |
27 |
25 |
9 |
32 |
|
8 |
20 |
23 |
25 |
22 |
10 |
26 |
|
9 |
18 |
17 |
19 |
15 |
6 |
23 |
|
10 |
18 |
21 |
20 |
17 |
6 |
24 |
|
11 |
18 |
21 |
21 |
20 |
6 |
26 |
|
12 |
20 |
29 |
26 |
26 |
14 |
32 |
|
13 |
18 |
21 |
20 |
18 |
6 |
28 |
|
14 |
19 |
20 |
20 |
18 |
18 |
23 |
|
15 |
18 |
20 |
20 |
17 |
19 |
24 |
|
16 |
18 |
21 |
20 |
18 |
14 |
23 |
|
17 |
18 |
20 |
21 |
18 |
10 |
25 |
|
18 |
18 |
20 |
20 |
18 |
8 |
23 |
|
19 |
16 |
21 |
19 |
16 |
6 |
23 |
|
20 |
18 |
21 |
23 |
19 |
10 |
25 |
|
21 |
18 |
22 |
21 |
20 |
9 |
28 |
|
22 |
18 |
20 |
21 |
17 |
6 |
25 |
|
23 |
19 |
23 |
23 |
20 |
9 |
24 |
|
24 |
18 |
21 |
22 |
19 |
9 |
23 |
|
25 |
15 |
23 |
21 |
19 |
6 |
24 |
|
26 |
18 |
23 |
20 |
21 |
6 |
28 |
|
27 |
16 |
21 |
21 |
22 |
6 |
26 |
|
28 |
19 |
20 |
20 |
18 |
14 |
23 |
|
29 |
18 |
20 |
19 |
17 |
6 |
24 |
|
30 |
19 |
23 |
25 |
20 |
8 |
28 |
|
31 |
18 |
27 |
23 |
21 |
8 |
32 |
|
32 |
18 |
21 |
23 |
22 |
8 |
26 |
|
33 |
18 |
23 |
22 |
18 |
9 |
24 |
|
34 |
21 |
22 |
25 |
25 |
6 |
32 |
|
35 |
18 |
25 |
25 |
23 |
15 |
26 |
|
36 |
18 |
21 |
22 |
20 |
6 |
23 |
|
37 |
18 |
6 |
23 |
21 |
6 |
23 |
|
38 |
18 |
20 |
21 |
21 |
6 |
24 |
|
39 |
19 |
20 |
23 |
21 |
7 |
27 |
|
40 |
18 |
22 |
25 |
24 |
14 |
15 |
Таблица 2
Критерии интерпретации результатов определения чувствительности диаметров зон подавления роста (мм) [7]
|
АБ |
Содержание в диске (мкг) |
Пограничные значения диаметров зон подавления роста (мм) |
||
|
Ч ≥ |
Р < |
ЗТН |
||
|
Амикацин |
30 |
18 |
18 |
|
|
Цефотаксим |
5 |
20 |
17 |
|
|
Амоксициллин-клавулан |
20+10 |
19 |
19 |
19–20 |
|
Ампициллин-сульбактам |
10+10 |
14 |
14 |
|
|
Сульфаметоксазол-триметоприм |
1,25+23,75 |
14 |
11 |
|
|
Цефтибутен |
30 |
23 |
23 |
|
Результаты и обсуждения
Наибольшую чувствительность Salmonella enteritidis (group D) проявляет по отношению к амикацину, амоксициллину-клавулан и ампициллин-сульбактаму — 100 % образцов (табл. 3). Меньшее количество чувствительных образцов Salmonella enteritidis (group D) получено в отношении цефтибутена и цефотоксина (97,5 % и 95 % образцов соответственно). Максимальная резистентность Salmonella enteritidis (group D) зарегистрирована в отношении сульфаметоксазол-триметоприма (82,5 %).
Таблица 3
Результаты чувствительности Salmonella enteritidis (group D) к исследуемым АБП в количественном и процентном соотношении
|
АБП |
||||||
|
AKN |
CTX |
АМС |
SAM |
SXT |
CFT |
|
|
Чувствительные |
40 (100 %) |
38 (95 %) |
40 (100 %) |
40 (100 %) |
7 (17,5 %) |
39 (97,5 %) |
|
Резистентные |
0 (0 %) |
2 (5 %) |
0 (0 %) |
0 (0 %) |
33 (82,5 %) |
1 (2,5 %) |
Выводы
1. Salmonella enteritidis (group D) проявляет разную чувствительность к АБП.
2. Чувствительность Salmonella enteritidis (group D) к большинству рассмотренных АБП остается высокой (95–100 %).
3. Наиболее низкая чувствительность у Salmonella enteritidis (group D) оказалась к сульфаметоксазол-триметоприму (17,5 %).
Литература:
- Лобзин Ю. В. Справочник по инфекционным болезням у детей. СПБ. 2013. 592 с.
- Страчунский Л. С., Белоусов Ю. Б., Козлов С. Н. Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии. Смоленск. 2007. 464 с.
- Методы контроля. Бактериологические и микробиологические факторы. Техника сбора и транспортировки биоматериала в микробиологические лаборатории. МУ 4.2.2039–05.
- Методические указания по лабораторной диагностике, эпидемиологии и профилактике сальмонеллезов.
- Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. МУК 4.2.1890–04.
- Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам диско-диффузионным методом. Код 04-СОП26-МБЛ. Дата утверждения 19.09.2022.
- Категорию чувствительности оценивали согласно рекомендациям EUCAST Версия 11.0. Действует с 01.01.2021.
