Сыворотка животных является идеальным источником питательных веществ для клеток в культуре, так как содержит белки, липиды, соли, витамины, минералы, аминокислоты и другие компоненты, необходимые для роста. При правильном хранении и обращении с сывороткой ее эксплуатационные характеристики могут сохраняться в течение многих лет. Неправильное хранение и/или оттаивание может привести не только к снижению мгновенной и долговременной стабильности, но и к снижению эффективности.
Данные о росте свидетельствуют о том, что при правильном хранении сыворотка сохраняет характеристики, поддерживающие ее рост, в течение всего срока хранения. Для обеспечения стабильности сыворотка должна храниться и обрабатываться надлежащим образом.
Как заморозить и разморозить фетальную бычью сыворотку (FBS), чтобы обеспечить ее стабильность.
Для эффективного сохранения целостности сыворотки животных ее следует хранить в замороженном виде и защищать от света. Рекомендуемая температура хранения составляет от -10 до -40 °C. При температуре ниже -40 °C бутылки для хранения могут стать хрупкими, что увеличивает риск их поломки.
Следует избегать многократных циклов оттаивания/замораживания, так как они ускоряют деградацию питательных веществ в сыворотке крови и могут привести к образованию нерастворимых осадков.
Рекомендуемая процедура размораживания для FBS и других сывороток.
Выньте бутылки с сывороткой из морозильной камеры и дайте им акклиматизироваться до комнатной температуры в течение примерно 10 минут.
Поместите каждый контейнер в водяную баню или инкубатор с температурой от 30 до 37 °C. Более высокие температуры ухудшат тепло-лабильные питательные вещества. При использовании водяной бани не погружайте бутылки выше уровня содержания сыворотки, чтобы предотвратить погружение крышек бутылок. Водяные бани являются обычным источником загрязнения сред и сыворотки.
Нежно перемешивайте или встряхивайте бутылочки каждые 10 - 15 минут, пока сыворотка не размоется полностью.
Метод, используемый для оттаивания сыворотки, жизненно важен для ее оптимальной работы. Ключом к правильному оттаиванию является периодическое перемешивание. Если по мере оттаивания бутылка сыворотки не будет регулярно встряхиваться или вращаться, то во всей жидкой фракции будут образовываться градиенты, внутри которых находятся высокие концентрации солей, белков и липидов, которые могут привести к образованию кристаллических или флокулянтных осадков. Последние не токсичны для клеточных культур, но влияют на внешний вид и согласованный состав фетальной бычьей сыворотки или других сывороток животных.
Нередки случаи, когда криопреципитаты разрежены, даже в сыворотке крови, которая размораживается с помощью рекомендованной процедуры. Это нормально и не влияет на эффективность продукта.
При неправильном оттаивании сыворотки может образовываться повышенный криопреципитат, который часто является нерастворимым. Фильтрация сыворотки для удаления криопреципитатов не рекомендуется, так как это может привести к непреднамеренной потере питательных веществ, таких как факторы роста и белки.
Быстро используйте размороженную сыворотку. Жидкую фетальную сыворотку можно хранить в охлажденном виде (от 2 до 8 °C) до четырех недель. Чтобы избежать циклов оттаивания/замерзания или утилизации неиспользованной сыворотки после более чем четырех недель охлаждения, рекомендуется немедленно разделить любую ненужную сыворотку в небольшие, подходящие для применения аликвоты в условиях стерильной культуры и замораживать для защиты стабильности при последующем использовании.
По материалам сайта www.laboratorii.com
