Под влиянием препарата Кобальт-30 увеличивается содержание палочкоядерных лейкоцитов. Эффект препарата сравнивался с Лактофлором. Оба препарата имеют одинаковый эффект. Кобальт 30 легко переносится больными и не оказывает побочного действия. Препарат может использоваться в клинике для лечения состояния лейкопений. Разработанные методики масс-спектрометрического определения кобальта-30 в таблетках.
Ключевые слова: кобальт-30, масс-спектрометрии, лимфопролиферативный, гемостимулирующий, периферическая кровь, мелкокристаллический, импортозамещающей продукции
В настоящее время фармацевтический рынок Узбекистана является одним из динамично развивающихся секторов национальной экономики, и ассортимент антианемических средств представлен достаточно широко. Однако анализ ценовой и ассортиментной политики на рынке противоанемических средств лекарственных препаратов показал, что необходимо принятие мер по разработке и внедрению в производство отечественных субстанций и лекарственных форм, а также диверсификации отечественного производства, путем разработки ассортиментных разновидностей и внедрения импортозамещающей продукции. Как известно в Ташкентском фармацевтическом институте проводится целенаправленный синтез лекарственны препаратов на основе координационных соединений биометаллов [1–3].
Актуальной задачей стандартизации и контроля качества лекарственных препаратов на основе координационных соединений является разработка и внедрение тех методов, которые наиболее полно отражали бы химическую сущность комплекса, а именно его химическую структуру, валентное координационные состояние металла и индивидуальность препарата. Кобальт-30 координационное соединение кобальта с метионином представляет собой мелкокристаллический порошок розового цвета со слабым специфическим запахом.
Целью данного исследования явилась разработка методики количественного определения кобальта-30 в таблетках методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой.
Экспериментальная часть
Уникальные возможности масс-спектрометрии позволяют использовать ее для исследования фундаментальных основ химии, фармации и создания научных основ прогнозирования, поисков и комплексного использования новых лекарственных препаратов для практической медицины. Пределы обнаружения для большинства элементов составляют менее 1∙10–9 грамма, а динамический диапазон позволяет одновременно определять концентрации примесных элементов и основных компонентов проб. Масс-спектрометрическое определение выполнено по “Методике выполнения кобальт-30 озоляли в платиновом тигле в муфельной печи при 450–5000С. Остаток обрабатывали 10 мл концентрированной соляной кислоты, выпаривали досуха, приливали 10 мл 2 М HCl, фильтровали в мерную колбу на 25 мл, тигель промывали водой, промывные воды объединяли с фильтратом и доводили объем до метки водой. Количество кобальта находили по резонансной линии 240,7 нм. Характеристическая концентрация Сх = 0,15 мкг/мл; предел обнаружения Собн = 0,01 мкг/мл.
Таблица 1
Результаты количественного определения кобальта-30 втаблетках масс-спектрометрическим методом (Q0,95; 3= 0,94)
|
№ серии |
Навеска порошка таблеток |
Найдено кобальта, мг |
Найдено кобальта-30, г, х |
|
R |
Qi |
Метрологические характеристики |
|
Таблетки по 0,015г |
|||||||
|
010505 |
0,3008 0,3027 0,3018 |
2,5035 2,5383 2,5201 |
0,01510 0,01531 0,01520 |
0,015203 |
0,00021 |
0,523 0,476 |
S2 = 1,10 ∙ 10–8
S
Д
|
|
020505 |
0,2995 0,2975 0,3016 |
2,4695 2,4870 2,5076 |
0,01489 0,01500 0,01512 |
0,015003 |
0,00023 |
0,521 0,478 |
S2 = 1,32 ∙ 10–8
S
Д
|
|
030505 |
0,3101 0,3088 0,3033 |
2,6577 2,6329 2,6047 |
0,01603 0,01588 0,01571 |
0,015873 |
0,00032 |
0,468 0,531 |
S2 = 2,56 ∙ 10–8
S
Д
|
|
040505 |
0,2988 0,3036 0,3005 |
2,4678 2,4877 2,4472 |
0,01488 0,01500 0,01476 |
0,014880 |
0,00048 |
0,500 0,500 |
S2 = 1,02 ∙ 10–8
S
Д
|
|
050505 |
0,3015 0,3024 0,3012 |
2,5334 2,5400 2,5035 |
0,01528 0,01532 0,01516 |
0,015253 |
0,00016 |
0,250 0,750 |
S2 = 0,694 ∙ 10–8
S
Д
|
, г
= 1,72 %
Таблица 2
Результаты количественного определения кобальта-30 втаблетках масс-спектрометрическим методом (Q0,95; 3= 0,94)
|
№ серии |
Навеска порошка таблеток |
Найдено кобальта, мг |
Найдено кобальта-30, г, х |
|
R |
Qi |
Метрологические характеристики |
|
Таблетки по 0,020г |
|||||||
|
060505 |
0,3549 0,3510 0,3490 |
3,2141 3,2480 3,2811 |
0,01938 0,01959 0,01979 |
0,019587 |
0,00041 |
0,487 0,512 |
S2 = 4,86 ∙ 10–8
S
Д
|
|
070505 |
0,3613 0,3587 0,3608 |
3,5166 3,5425 3,5077 |
0,02121 0,02136 0,02115 |
0,021240 |
0,00065 |
0,714 0,286 |
S2 = 1,17 ∙ 10–8
S
Д
|
|
080505 |
0,3628 0,3608 0,3600 |
3,5381 3,5812 3,5680 |
0,02134 0,02160 0,02152 |
0,021487 |
0,00026 |
0,307 0,692 |
S2 = 1,77 ∙ 10–8
S
Д
|
|
090505 |
0,3485 0,3498 0,3472 |
3,0424 3,0623 3,0540 |
0,01835 0,01847 0,01842 |
0,018413 |
0,00012 |
0,416 0,583 |
S2 = 0,364 ∙ 10–8
S
Д
|
|
100505 |
0,3509 0,3533 0,3527 |
3,3491 3,3707 3,3408 |
0,02020 0,02038 0,02015 |
0,020227 |
0,00018 |
0,722 0,277 |
S2 = 0,864 ∙ 10–8
S
Д
|
Статистическая обработка результатов количественного определения кобальта-30 в таблетках показала, что вычисленные значения контрольного критерия для идентификации грубых ошибок Qi не превышают табличное значение Q(0,95; 3)=0,94, поэтому выборка малого объема (n<10) однородна, не отягощена грубой ошибкой и значения Х, S2 и S
достоверны. Относительная стандартная ошибка масс-спектрометрического метода не превышает 2,5 % для анализа таблеток кобальта-30. Оптическую плотность окрашенных растворов измеряют на спектрофотометре “Beckman” DU65 (или СФ-46) при длине волны 420 нм, в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм — по отношению к раствору сравнения — смеси, полученной аналогичным образом в отсутствие кобальта-30.
Определение однородности дозирования кобальта-30 втаблетках
Испытание проводили согласно требованиям ГФ ХI, вып. 2, с. 156. Из каждой серии таблеток кобальта-30 отбирали 10 таблеток, в которых определяли содержание кобальта-30 спектрофотометрическимметодом с нитрозо-R-солью. Определение основано на образовании окрашенного внутри-комплексного соединения кобальта (II) с нитрозо-R-солью (1-нитрозо-2-окси-нафталин-3,6-дисульфонат натрия) Реакция комплексообразования завершается в течение 5 мин. при комнатной температуре и 3 мин. при температуре кипения в ацетатной среде. Щелочные и щелочноземельные металлы, хлорид, сульфат, нитрат, ацетат и цитрат-ионы не мешают определению. Закон Бугера-Ламберта-Бера соблюдается в широком интервале концентраций ионов кобальта (II) [4–7].
Методика определения: тонко измельченную одну таблетку кобальта-30 растворяют в 5 л 2 моль/л раствора хлористоводородной кислоты, в мерной колбе на 100 мл, объем доводят до метки водой, перемешивают и фильтруют. Отбирают 0,50 мл (для таблеток 0,015г) и 0,25 мл (для таблеток 0,020г) раствора в мерную колбу на 25 мл, добавляют 2 мл 15 % раствора натрия лимоннокислого, 2 мл 40 % раствора натрия ацетата и 2 мл 0,2 % раствора нитрозо-R-соли. Смесь нагревают до кипения, охлаждают, добавляют 2 мл концентрированной азотной кислоты, доводят объем водой до 25 мл и перемешивают. Оптическую плотность окрашенных растворов измеряли на спектрофотометре “Beckman” DU65 (или СФ-46) при длине волны 420 нм, в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм — по отношению к раствору сравнения — смеси, полученной аналогичным образом в отсутствие препарата кобальта-30. Содержание кобальта-30 находят по калибровочному графику. Растворы для построения калибровочного графика готовили из субстанции препарата с содержанием кобальта-30 не менее 99,8 %. Стандартный раствор препарата содержит 100 мкг кобальта-30 в 1 мл. Калибровочный график построен по выше приведенной методике в интервале концентраций 20–100 мкг кобальта-30 (рис. 3.1.). Предлагаемым методом анализировано 5 серий таблеток кобальта-30 (таблица 3.2).
Содержание кобальта-30 в одной таблетке находят по формуле:
г
где х — найдено кобальта-30 мкг по калибровочному графику;
V1 — объем разведения (100 мл);
V2 — аликвота (0,5 мл для таблеток по 0,015 г,
0,25 мл для таблеток по 0,020 г)
Рис. 1. Калибровочный график для определения однородности дозирования кобальта-30.
Разработанный в ТашФарми препарат кобальт-30, является гемостимулирующим средством, особенно эффективно действующим на гранулоцитопоэз при вторичных лейкопениях. При длительном применении кобальт-30 не оказывает отрицательного действия на гистоморфологию жизненно важных внутренних органов. Клинические испытания кобальта-30 проводились под руководством проф. Меметова Ф. Б., доц. Туйджановой Х. Х. (РОНЦ), проф. Исамухамедовой М. А. и канд. мед. наук Мамадалиевой Я. С. (ТашИУВ) и проф. Буглановым А. А.(ННИ Гематологии) у больных с нарушением гемопоэза, особенно сопровождающегося лейкопеническим состоянием возникающем при действии ионизирующей радиации и для профилактики и лечения лучевой терапии больных со злокачественными опухолями. Оценивалась эффективность и переносимость таблеток кобальт-30 у больных, страдающих вторичной лейкопенией, возникшей вследствие химиотерапии злокачественных новообразований.
Кобальт-30 назначался по 1 таблетке 3 раза в день до еды в течение 3–4 недель. Больные группы сравнения получали Лакто Флор в течение 30 дней. Клиническая оценка проводилась по степени улучшения картины периферической крови (количества лейкоцитов) и общего состояния больного. Полученные результаты обработаны методом вариационной статистики.
Результаты клинических испытаний показали, что из 90 больных положительный гемостимулирующий эффект отмечен у 69 больных (81,2 %) и слабый эффект — у 11 больных (12,9 %). Эффективность кобальта-30 изучена в сравнительном аспекте с ЛактоФЛОРом, который также оказывает гемостимулирующий эффект при лейкопениях. Установлено, что действие кобальта-30 равнозначно действию ЛактоФЛОРа. Однако кобальт-30 оказывает более специфическое действие на лейкопоэз. Следует подчеркнуть, что кобальт-30 в основном оказывает гемостимулирующий эффект на зернистые лейкоциты, тогда как на незернистых клетках лимфоцитов больных с лимфопролиферативными заболеваниями гемостимулирующий эффект не проявляется.
Литература:
- А. Н. Юнусходжаев. Цинк-дефицитное состояния: взгляд на проблему / Медицинский журнал Узбекистана, 2008. № 5. — С. 56–58.
- Садриддинов А.Ф., Смаглюк Н..Г., Исамухамедова М. А., Мухамедова Б. И. Клиническая эффективность кобальта-30 при лечении больных вторичной лейкопенией / ХII Россиский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Тез. докл. М; 2005. 231с
- Смаглюк Н. Г., Садриддинов А.Ф., Туйджанова Х. Х., Мухамедова Б.И Опыт применения препарата Кобальт-30 в качестве стимулятора лейкопоэза //Санкт-Петербургская ассамблея-2004 «Врач-Провизор- Пациент»: Тез. докл. СПб; 2004. 75с.
- Фармакопея. Изд. 11-е. М; Медицина. 1987. Вып.205с.
- Саипова Д. Т. Ретроспективный анализ в стационарных условиях// Материалы научно-практической конференции: “Актуальные вопросы образования, науки и производства в фармации”. — Ташкент, 2008. — С. 228–229.
- Хавезов И., Цалев Д. Атомно-абсорбционный анализ. — Ленинград: Химия, 1983. — 89–92 с.
- Козлов В. В., Мухамеджанова Д. В. Аналитическая база Института геологии и геофизики им. Х. М. Абдуллаева АН РУз // Современные аналитические методы и приборы в геологии и охране окружающей среды: Тез. докл. научного семинара 12–14-октября, 1998. — Ташкент, 1998. — С. 10.
