Метаболиты сибирских изолятов грибов рода Trichoderma: выраженная антибиотическая активность

Ключевые слова: бактерицидное действие, метаболиты грибов рода Trichoderma, метод лунок, микроорганизмы.

Key words: bactericidal action, metabolites of fungi of the genus Trichoderma, method of the holes, bacteria.

Введение

Изучение новых веществ с антимикробной активностью есть одно из важнейших направлений преодоления лекарственной устойчивости микроорганизмов. В настоящее время число таких антимикробных препаратов постоянно увеличивается [1].

Известно, что культуральная жидкость несовершенных грибов содержит вещества с антибиотическими свойствами. Исследования в этой области ведутся достаточно активно; постоянно обнаруживаются новые метаболиты с полезными свойствами [2; 3].

Как известно, грибы рода Trichoderma являются продуцентами метаболитов, обладающих высокой антибиотической активностью в отношении грибов и бактерий. Исследования в этой области ведутся очень активно и постоянно находятся новые метаболиты с полезными свойствами [4; 7].

Сибирские изоляты грибов рода Trichoderma изучены недостаточно [5; 6].

Целью настоящей работы являлось изучение антибиотической активности метаболитов сибирских изолятов грибов рода Trichoderma в отношении штаммов Salmonella moskaw и Streptococcus haemoliticus.

Методика

Объектами исследования служили стерильные метаболиты, полученные из штамма М 99/5 гриба T. harzianum и из нетипированного штамма 119-85 Trichoderma sp.

Грибы культивировали на бульоне Чапека методом глубинного культивирования на качалке в течение пяти суток при температуре 25±2˚С.

В работу был взяты штаммы. Salmonella moskaw и Streptococcus haemolyticus, выделенные во время оперативного вмешательства от больных панкреанекрозом пациентов городской клинической больницы № 7 г.Красноярска.

Предварительное культивирование штаммов осуществлялось на питательном агаре (ГРМ-агар производства ФГУП «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии») с последующим инкубированием в термостате в течение трёх суток при 37˚С. Полученные изолированные типичные колонии отбирали бактериологической петлёй и суспендировали в пробирках со стерильным физиологическим раствором по стандарту мутности. Посевная доза взвеси микроорганизма составляла 1,5х10⁸ КОЕ/мл (0,5 по стандарту мутности McFarland).

Посев приготовленных суспензий осуществляли по Кирби-Бауэру отжатым ватным тампоном в трёх направлениях на пластины подсушенного агара Мюллера-Хинтон, разлитого толстым слоем в чашках Петри. Определение бактерицидной активности исследуемых экстрактов осуществляли методом лунок.

Сразу после посева стандартизованной взвеси микроорганизмов в каждой засеянной чашке Петри стерильным пробочным сверлом диаметром 10 мм делали на одинаковом расстоянии шесть лунок, затем автоматической пипеткой постоянного объёма в каждую лунку одноразовым стерильным наконечником вносили 100 мкл исследуемого метаболита. Контролем в опыте служил физиологический раствор.

После внесения метаболита чашки Петри инкубировали не переворачивая в термостате при температуре 37˚С в течение шести суток. Все опыты проводились в пятикратной повторности. Наблюдения за ростом тест-культуры начинали после суток инкубирования.

Измерение диаметра задержки роста микроорганизмов проводили на пятые и десятые сутки инкубирования.

Статистическую обработку результатов проводили с помощью пакета прикладных программ STATISTICA v.6.0. Рассчитывали среднее значение и среднеквадратичное отклонение, достоверность отличий определяли по непараметрическому критерию Манна-Уитни.

Результаты

В ходе проведённой работы было установлено, что изученные метаболиты T. harzianum М 99/5 и Trichoderma sp. 119-85 обладают выраженным бактерицидным действием в отношении изучаемых штаммов.

Таблица 1

Величина зон отсутствия роста штаммов вокруг лунок, содержащих растворы культуральной жидкости T. harzianum М 99/5 (M±σ, мм)

Наибольшая величина зоны подавления роста (18,0±3,0 мм, р<0,05) наблюдалась при действии на S. moskaw метаболита штамма М 99/5 гриба вида T. harzianum

(табл.):

Таблица 2

Величина зон отсутствия роста штаммов вокруг лунок, содержащих растворы культуральной жидкости Trichoderma sp. 119-85 (M±σ, мм)

Проведённые исследования позволяют установить антибиотическую активность сибирских изолятов грибов рода Trichoderma на изученные штаммы микроорганизмов: оба штамма обладают выраженным бактерицидным действием.

Механизм действия антибиотических веществ, находившихся в изучаемых метаболитах, связан, по-видимому, с действием на клеточную стенку бактерий. Полученные результаты позволяют обосновать важность и перспективность полученных метаболитов как сырья для новых микробиологических препаратов.

Литература:

1. Яковлев В.П., Яковлев С.В. Перспективы создания и внедрения новых антимикробных препаратов // Инфекции и антимикроб. химиотерапия. – 2002. – №4(2). – С.1-5.

2. Сейкетов Г.Ш. Грибы рода Trichoderma и их использование в практике. – Алма-Ата: Наука, 1982. – 245 с.

3. Шариков А.М. Исследование антибактериальной активности метаболитов некоторых высших грибов Средней Сибири // Современные наукоёмкие технологии. – 2010. – № 6. – С. 128-129.

4. Sharikov A.M, Neshumaev D.A., Zaika N.A. et al. To the issue of using of the fungi of Trichoderma kind as the producent of the biologicalli active substances // Program & abstracts: The XII Symposium of the Rassia – Japan medical exchange. – Krasnojarsk, 2005. – P. 661-662.

5. Шариков А.М. Выраженная антибиотическая активность грибов рода TRICHODERMA в отношении штамма BACILLUS ANTHRASIS СТИ-1 // Научная перспектива. – 2010. – №10. – С. 92-93.

6. Шариков А.М. Изучение антибиотической активности метаболитов грибов рода TRICHODERMA в отношении бактерий рода VIBRIO // Актуальные проблемы гуманитарных и естественных наук. – 2010. – № 10. – С. 24-25.

7. Molitoris H. P. Mushrooms in medicine // Folia Mikrobiol. – 1994. – V. 39. – N 2 –.P.91-98.