В настоящее время патология печени у животных и человека занимает значительное место и имеет самую широкую неинфекционную, инфекционную, токсигенную и аллергическую этиологию. Наибольшее значение, из общего количества патологических процессов печени, занимают гепатиты — воспаления печени, которые морфологически проявляются гиперемией, клеточной инфильтрацией, дистрофией, некрозом гепатоцитов и других структурных компонентов органа [1]. Поэтому разработка высокоэффективных гепатопротекторных препаратов является актуальным [2].
Целью настоящей экспериментальной работы явилось изучение гепатопротекторной эффективности отечественного препарата «Дипромония-М» путем проведения цикла гематологических и патоморфологических исследований на лабораторных животных (белых крысах) invivo.
Для установления эффективности препарата «Дипромоний-М» опыт проводили, экспериментально моделируя токсический гепатита у белых крыс путем перорального введения четыреххлористого углерода — тетрахлорметана (ССl4), который представляет собой бесцветную прозрачную жидкость, растворимую в органических соединениях. Токсическая доза препарата для лабораторных крыс, установленная нами составила 0,4 мл/кг массы тела при трехкратном введении.
Опыты проводили на белых крысах обоего пола (по десять самок и десять самцов), средней живой массой самцов 291 г, а самок 266 г. Из них было создано две группы — опытная и контрольная. Эксперименты проводили согласно правилам лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ (ГОСТ Р 51000.3–96, ГОСТ Р 51000.4–96). Убой животных осуществляли декапитацией (Международные рекомендации по проведению медико-биологических исследований с использованием животных, 2007).
Животным первой группы, для моделирования острого токсического гепатита, подкожно вводили по 0,4 мл 50 %-го масляного раствора четыреххлористого углерода на 100 г массы тела в течение четырех суток. Руководствопо экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (Р. У. Хабриева, 2005), а также препарат «Дипромоний-М» в дозе 5 мг/кг массы тела перорально, один раз в день, в течение 14 дней.
Крысам второй группы, аналогично моделировали токсический гепатит, а препарат «Дипромоний-М» в дозе 5 мг/кг массы тела перорально, три раза в день, в течение 14 дней.
Кровь у животных обеих групп отбирали в конце экспериментального периода непосредственно в период декапитации.
Кусочки печени размером 2х2х2 см фиксировали в 10 %-ном растворе нейтрального формалина в течение 3-х суток. Проводку, осуществляли общепринятыми в патоморфологии методами, уплотнение и заливку в парафин (Г. А. Меркулов, 1969). Срезы толщиной 5–6 мкм готовили при помощи санного микротома МС-2. Микропрепараты окрашивали гематоксилином и эозином, а для выявления углеводов применяли окраску кармином по Бесту.
Оценку эффективности гепатопротекторного действия препарата проводили по степени нормализации биохимических показателей основных патологических синдромов, наблюдающихся при поражениях печени: цитолиза — по активности в сыворотке аминотрансфераз; нарушение динамики желчи — по активности в сыворотке крови ЩФ, содержанию билирубина, общего белка и холестерина. Кроме того эффективность гепатопротекторного действия препарата определяли по клиническим признакам, выживаемости животных и патоморфологическим исследованиям.
Статистическую обработку полученных результатов проводили при помощи ПК с использованием пакетов статистических программ ARCADA, MicrosoftExcel ХР и StatisticaforWindows 6.0. Исследование количественных признаков проводилось методом сравнения средних значений двух выборочных совокупностей с определением критерия Стьюдента и уровня значимости (p).
В первой группе крыс, в первые 4 дня опыта, клиническая картина характеризовалась гиподинамией, снижением аппетита (уменьшение потребления корма и воды), взъерошенностью шерсти. У двух животных отмечали желтушность слизистых оболочек и склеры. Снижение массы тела в этой группе животных в среднем составила 26 %, а две крысы пали.
Во второй группе крыс, в течение первых суток, у двух животных отмечали угнетение и снижение аппетита. На вторые сутки и далее в течение всего эксперимента, животные были подвижны и хорошо принимали корм и воду. К 14-му дню эксперимента шерстный покров вернул свой первоначальный блеск и окраску, летальность в этой группе отсутствовала.
При патоморфологическом исследовании структуры печени животных первой группы наблюдали признаки острого диффузного воспаления. При этом альтернативные процессы были хорошо выражены в виде кариолизиса и кариопикноза гепатоцитов, зернистой и жировой дистрофии гепатоцитов, а также углеводной дистрофии, которая характеризовалась отсутствием гликогена на периферии печеночных долек с сохранением небольшого его количества в центре долек. Кроме этого отмечали экссудативные процессы, которые характеризовались агрегацией эритроцитов и стазами в микрососудах, отеком стенок и десквамацией эндотелия центральных вен и синусоидных капилляров.
При патоморфологическом исследовании печени у крыс второй группы признаков острого гепатита не выявляли. В центральных частях некоторых печеночных долек отмечали участки зернистой и жировой дистрофии гепатоцитов. Гликоген равномерно распределялся в цитоплазме гепатоцитов, как в центре, так и на периферии долек. Наряду с дистрофическими процессами по их периферии отмечали процессы репаративной регенерации, которые характеризовались гипертрофией и митозом отдельных гепатоцитов.
Таким образом, на основании проведенных нами исследований, можно сделать следующий вывод, что препарат «Дипромоний-М» в дозе 5 мг/кг массы тела при перорально трёхкратном введении, в течение 14 дней, обладает хорошо выраженным гепатопротекторным и регенерационным свойством.
Литература:
- Самсоненко А. А., Кравченко В. М. Патоморфологическая характеристика гепатозов, гепатитов и циррозов печени. Актуальные вопросы морфологии, диагностики и патоморфологии животных: материалы первой студенческой научной межпредметной конференции. Краснодар, КубГАУ, 2012. – с. 36–39.
- Кузьминова Е. В., Семененко М. П., Кравченко В. М., Будюк Р. Способ терапии экспериментального токсического гепатита. Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной 50-летию Западно-Казахстанского аграрно-технического университета имени Жангир хана. Орал, Уральск, 2013. — с. 277–278.
