В статье приведены результаты исследований, где было установлено, что изученные производственные штаммы лептоспир и пастерелл обладали характерными биологическими свойствами, в том числе антигенными и вирулентными. Полученные результаты будут использованы для определения антагонизма и синергизма штаммов.

Ключевые слова: пастереллы, лептоспиры, иммунопрофилактика, вирулентность, антигены, иммунный ответ, РМА, РДП.

Увеличение производства продуктов скотоводства при одновременном снижении их себестоимости одна из главных задач, стоящих перед животноводами Республики Казахстан.

В ее реализации видное место принадлежит ветеринарным мероприятиям, направленным на профилактику и ликвидацию болезней животных, обеспечение выпуска доброкачественных и экологически чистых продуктов животноводства. В настоящее время известно около 300 нозологических единиц инфекционных болезней животных, ряд которых представляет серьезную угрозу для народного хозяйства.

По классификации Международного эпизоотического бюро МЭБ в 1979 году пастереллез крупного рогатого скота был включен в список В. 1 По последним данным пастереллез животных остается в списке В МЭБ как менее опасная, но достаточно широко распространенная среди крупного рогатого скота, после лейкоза, туберкулеза, кампилобактериоза.

Болезни списка Б — контагиозные болезни, которые считаются опасными с социально-экономической и санитарной точек зрения. Занос возбудителей этой инфекций при международной торговле животными и продуктами животноводства может иметь крайне неблагоприятные последствия.

Интенсивные исследования, проведенные во многих направлениях в течение нескольких десятков лет, коренным образом изменили существовавшее представление и значительно расширили наши познания о пастереллезах сельскохозяйственных животных.

В настоящее время общепризнанно, что кроме геморрагической септицемии, холеры у птиц, пастереллы участвуют в развитии энзоотической пневмонии, энтеритов, артритов, абортов среди коров, овцематок, свиноматок и т. д.

Широкое распространение пастереллеза среди домашних, диких животных и птиц непосредственно влияет на ухудшение эпизоотологической и эпидемиологической обстановки по данной инфекции, нанося большой экономический ущерб сельскому хозяйству.

Впервые лептоспироз как самостоятельное заболевание человека был описан Вейлем в 1886г, а в России 1888 г это заболевание было описано Васильевым. Начало изучения лептоспироза в Казахстане связано с именем ученого Барташевича Е. Н., который 1938 году наблюдал вспышку лептоспироза среди людей в предгорьях Алатау 2. Частые вспышки лептоспироза среди людей наблюдались и в 40-ые годы. Распространение среди животных возникли в результате эвакуации сельскохозяйственных животных в Казахстан во время войны. В послевоенные годы во многих регионах страны продолжались массовые заболевания людей и животных лептоспирозом, отмечено образование природных и хозяйственных очагов болезни.

Интерес к пастереллезу и лептоспирозу животных с научной и практической точки зрения обусловлено, природной очаговостью, бактерионосительством животных, появлению не только единичных случаев заболевания, но и крупных вспышек, как среди домашних, так и диких животных.

Как показывает мировой опыт, во многих случаях одним из основных средств специфической профилактики против любой инфекций животных является вакцинация. В связи с этим большое значение продается применению комплексных и ассоциированных вакцин, преимущество которых заключается в создании иммунитета сразу к нескольким болезням одновременно при отсутствии у животных иммунодепрессивных процессов, повышении производительности труда, снижения рутинной работы и травмирования животных.

В истории ассоциированной вакцинации первыми стоят имена французских ученых, Widаl F. и Siсеаrd I., которые в 1897 г. испытали возможность иммунизации смесью двух вакцин против брюшного тифа и холеры и получили хорошие результаты. В дальнейшем существенный вклад в изучении ассоциированных вакцин внес Саstеllаni А., получивший и прекрасные результаты не только на лабораторной модели при проверке вакцин, состоящих их трех и более антигенов, но и на основании успешного применения ассоциированных вакцин на людях, им были привиты тысячи человек на острове Цейлон 3.

Однако вместе с внедрением в практику некоторых ассоциированных вакцин, возникла теория о конкуренции антигенов.

Появление теории конкуренции антигенов сыграло отрицательную роль, затормозив дальнейшее исследование и развитие ассоциированной вакцинации.

Заслуга французского иммунолога Rаmоn G в том, что он опроверг теорию конкуренции антигенов. Он не только не наблюдал какого-либо подавляющего действия одного антигена другим антигеном, а наоборот отметил усиление иммунологического эффекта, назвав это явление синергией антигенов. Следовательно, вопрос о конкуренции и синергизме антигенов на иммунологическом уровне может быть решен путем подбора доз отдельных вакцинных компонентов, входящих в ассоциированный препарат 4. В этой связи, исследования по усовершенствованию средств специфической профилактики лептоспироза и пастереллеза крупного рогатого скота остаются актуальными.

Материалы иметоды исследований.

Целью наших исследований было — изучение антигенных и вирулентных свойств лептоспир и пастерелл, входящих в состав поливалентных вакцин.

В настоящее время описано около 202 серологических вариантов патогенных лептоспир, объединенные в 23 серологические группы. Но для Казахстана актуальны 6 серогрупп. Для выпуска полноценной вакцины против лептоспироза животных, нами были изучены биологические свойства производственных штаммов лептоспир Lерtоsрirа hеbdоmаdis, Lерtоsрiа роmоnа, Lерtоsрirа griрроtурhоsа, Lерtоsрirа sеjrое, Lерtоsрirа iсtеrоhаеmоrrhаgiае, Lерtоsрirа tаrаssоvi.

Антигенные свойства вышеизложенных производственных штаммов лептоспир изучали путем внутрибрюшинного введения 5–7 дневной культуры с накоплением лептоспир [150–200] в поле зрения микроскопа, золотистым хомячкам 2–3 недельного возраста массой 40–50 г. Через 14 дней после заражения, хомячков обескровливали, и полученные сыворотки изучали на наличие в них антител в реакции микроагглютинации [РМА]. Данные отражены в таблице 1.

Таблица 1

Антигенная активность производственных штаммов лептоспир вРМА

Реакции микроагглютинации [РМА] ставили с производственными штаммами серогрупп Роmоnа, Griрроtурhоsа, Hеbdоmаdis, Sеjrое, Iсtеrоhаеmоrrhаgiае, Tаrаssоvi которые были использованы для заражения [предварительно все культуры лептоспир были пассированы через золотистых хомячков].

Полученные данные показывают, что иммунные сыворотки содержат агглютинины в титрах против серотипа Hеbdоmаdis — 1:25600, Роmоnа — 1:52000, Griрроtурhоsа — 1:25600, Sеjrое — 1:52000, Iсtеrоhаеmоrrhаgiае — 1:25600, Tаrаssоvi — 1:52000.

Вирулентность производственного штамма L. роmоnа определена дозой 4,4 х 10⁵ клеток, которая вызывает гибель золотистых хомячков. Вирулентность производственного штамма L. hеbdоmаbis, вызывающей гибель животных при внутрибрюшинном введении, 2,6х10⁶, штамма L.griрроtурhоsа — 5,0х10⁶, L.iсtеrоhаеmоrrhаgiае — 7,0х10⁶,. L.tаrаssоvi — 1,2 х10⁶.

Перед изучением антигенных свойств производственных штаммов пастерелл серотипа В и Д нами были получены капсульные антигены по методу G.Саrtеr. Также нами были получены кроличьи сыворотки к этим антигенам.

Антигенные свойства производственных штаммов пастерелл серотипов В и Д были изучены в реакции диффузной преципитации РДП по Оuсhtеrlоnу с гомологичными антисыворотками. Для определения активности пастереллезных антигенов в РДП, мы применяли пастереллезную сыворотку в титре 1:1280, а антигены в разведениях 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 и 1:32. Положительные реакции наблюдали в разведениях 1:2–1:16 с пастереллезными антисыворотками серотипа В и Д. В тоже время ставили РДП для определения специфичности антигенов Р.multосidа со стандартными гипериммунными сыворотками Sаlm.еntеritidis, Еsсhеriсhiа соli, Bruсеllа аbоrtus. Пастереллезные антигены с данными сыворотками реагировали отрицательно.

Далее нами были изучены вирулентные свойства производственных штаммов пастерелл серотипа В и Д на белых мышах с массой 18–20 г. [таблица 2] с определением ЛД₅₀ путем внутрибрюшинного введения вирулентной культуры пастерелл 500 КОЕ, 1000 КОЕ и 15000 КОЕ. Вирулентность производственных штаммов пастерелл для белых мышей к серотипу В составило 500 КОЕ., и к серотипу Д- 500 КОЕ.

Таблица 2

Вирулентные свойства производственных штаммов пастерелл на белых мышах

Таким образом, изученные нами производственные штаммы лептоспир и пастерелл обладали характерными биологическими свойствами, в том числе антигенными и вирулентными свойствами. Полученные результаты будут использованы для определения антагонизма и синергизма штаммов.

Литература:

1. Еременко И. Я. Информационный материал отдела инфекционных болезней и организации противоэпизоотических мероприятий Департамента ветеринарии МСХ РФ, Москва, 2006, С.43–47.
2. Черных И. П. О влиянии природных и экономических факторов на распространенность лептоспироза среди населения Алма-Атинской области. Матер. 2 научн.-практич. конф. КИЭМ, Алма-Ата, 1970, С.245–251.
3. Ильясов Б. К. Эпизоотология лептоспироза животных в Казахстане и меры борьбы с ним. Автореф., док. вет. наук., Алматы, 1999, 36с.
4. Кадымов Р. А., Алиев Р. М. Динамика иммуногенеза при вакцинации животных против пастереллеза и анаэробных инфекциях//Ветеринария, 1998, № 6, С. 43–46.