Изучен рост 5 штаммов L. muscariumна средах с различными источниками углеводов. Выделено 5 морфотипов и определена скорость роста для каждого штамма. Для штамма Vl72 выявлена связь продуктивности спороношения с внешним видом колоний, наибольшие титры спор получены при росте на сахарозе (6,8·107 спор/см2) и крахмале (4,5·107 спор/см2).
Ключевые слова:энтомопатогенные грибы, Lecanicilliummuscarium, морфотип, культивирование, биопестициды.
It was studied the growth of 5 strains of L. muscarium on media with various sources of carbohydrates. Based on their morphological features colonies were divided into 5 morphotypes, and rate of growth was determined. It was found the connection between the efficiency of a sporulation and appearance of colonies for strain Vl 72. The greatest titers of spores are shown at growth on sucrose (6,8·107 conidia/cm2) and starch (4,5·107 conidia/cm2).
Keywords:entomopathogenic fungi, Lecanicillium muscarium, morphotype, cultivation, biopesticides.
На основе энтомопатогенного гриба Lecanicillium muscarium (Petch.) Zare & W. Gams (бывший комплексный вид Verticillium lecanii), который является природным патогеном насекомых из отряда Homoptera [1, с. 11-12; 2, с. 389–391], в нашей стране и за рубежом разрабатываются микробиологические препараты для защиты овощных и декоративных культур в закрытом грунте [3, с. 237–256]. Для производства биопестицидов важно подобрать такие источники углеводов, при росте на которых гриб обладает высокими показателями продуктивности по биомассе и спорам, а также скорости роста. Известно, что некоторые сахара обладают защитными свойствами [4, с. 1], сохраняя споры при высушивании для получения сухого биопрепарата, другие же углеводы (глицерин, крахмал) используются для производства пастообразных препаративных форм [5, с. 1].
Для выявления различий в утилизации сахаров исследованы 5 штаммов энтомопатогенного гриба Lecanicillium muscarium, депонированные в коллекции ВИЗР. На основе среды Чапека составлено 6 питательных сред, в которых в качестве источников углеводов использованы сахара различных классов: лактоза, рамноза, арабиноза, крахмал, глицерин и сахароза. В ходе исследования измеряли скорость роста грибов (диаметр колоний на 7, 10 и 14 сутки при температуре 28 0С) и изучали морфологию колоний на 10 сутки. Для штамма Vl 72 определена продуктивность конидий на средах по титру спор с 1 см2.
По внешнему виду колонии условно разделены на 5 морфотипов. При росте на лактозе и рамнозе все исследованные штаммы образовывали плоские паутинистые колонии (морфотипы А и С), а на средах с глицерином и сахарозой - преимущественно выпуклые и пушистые (морфотипы B и D). На арабинозе и крахмале штаммы образовывали колонии всех 5 морфотипов (рис. 1).
Рис. 1. Морфология колоний на средах с различными источниками углеводов.
Для штамма Vl 68 отмечено образование эксудата при росте на глицерине. Существенных различий в скорости роста на разных углеводах не выявлено.
Наибольшие титры спор для штамма Vl 72 обнаружены при росте на сахарозе (6,8·107 спор/см2) и крахмале (4,5·107 спор/см2) (табл. 1). Самое скудное спороношение отмечено на рамнозе (1,8·107 спор/см2), в то же время скорость роста штамма на разных средах различалась незначительно (рис. 2).
Таблица 1
Характеристики колоний штамма Vl 72 при росте на агаризованных средах с различными источниками углеводов.
|
Характеристика |
Углеводный компонент питательной среды |
|||||
|
лактоза |
рамноза |
арабиноза |
крахмал |
глицерин |
сахароза |
|
|
Диаметр колонии, мм |
30,3 |
31,7 |
29,0 |
31,7 |
28,0 |
30,0 |
|
Титр, спор/см2 |
3,1·107 |
1,8·107 |
3,6·107 |
4,5·107 |
3,2·107 |
6,8·107 |
Рис. 2. Внешний вид колоний штамма Vl 72 на средах с разными сахарами.
У штамма Vl 72 с бархатистой текстурой колонии на крахмале (тип Е, рис. 2) титр был выше, чем у колоний с развитым воздушным мицелием (B и D). Это подтверждает результаты, полученные другими авторами при изучении биоразнообразия штаммов V. lecanii [6, с. 400-404; 7, 19 с.].
Работа поддержана грантом РФФИ № 13-04-01905.
Литература:
1. Евлахова А. А. Применение гриба Cephalosporium lecanii Zimm. для борьбы с цитрусовой щитовкой // Доклады ВАСХНИЛ. 1939. Т. 11. С. 11–22.
2. Hall R. A. Verticillium lecanii on the aphid, Macrosiphoniella sanborni // Journal of Invertebrate Pathology. 1976. Vol. 28, № 3. P. 389–391.
3. Faria M.R., Wraight S.P. Mycoinsecticides and mycoacaricides: a comprehensive list with worldwide coverage and international classification of formulation types // Biological Control. 2007. Vol. 43. P. 237–256.
4. Митина Г. В., Сокорнова С.В., Павлюшин В. А. Энтомопатогенный биопрепарат для защиты растений от вредителей и способ его получения // Патент РФ №2487542 от 21.10.2011. Опубликовано 20.07.2013. Бюл. № 20. С. 1-12.
5. Митина Г. В., Чоглокова А. А., Павлюшин В. А. Способ получения энтомопатогенного препарата // Патент РФ №2421995 от 17.11.2009. Опубликовано 27.06.2011. Бюл. № 18. С. 1-6.
6. Соловей Е. Ф. Гетерогенность популяции Verticilliumlecanii (Zimm.) Viegas // Микология и фитопатология. 1980. Т. 14, № 5. С. 400-404.
7. Аванесов С. Г. Биологические основы отбора вирулентных штаммов энтомопатогенного гриба V. lecanii (Zimm.): Автореф. дис. к.б.н. Л. 1987. 19 с.
