ПЦР-лаборатории | Статья в журнале «Молодой ученый»

Отправьте статью сегодня! Журнал выйдет 13 марта, печатный экземпляр отправим 17 марта.

Опубликовать статью в журнале

Рубрика: На правах рекламы

Опубликовано в Молодой учёный №41 (227) октябрь 2018 г.

Дата публикации: 18.12.2019

Статья просмотрена: 59 раз

Библиографическое описание:

None

Недорогой, но точный метод ДНК-диагностики востребован генной инженерией, палеонтологией, антропологией, сельским хозяйством и судебной медициной. Полимеразная цепная реакция в клинической медицине имеет много вариаций и целей, но применяется по большей части для выявления инфекционного возбудителя в генетическом материале – ДНК в виде генома, суспензии или частички молекулы.

Исследования

Все виды PCR проводят в клинико-диагностических лабораториях. С помощью ПЦР создают копии части ДНК из образца, значительно увеличив его концентрацию в пробе.

Посредством PCR-анализа обнаруживают:

  • гепатит, вызываемый вирусами – B, C, D, G;
  • инфекции урогенитальные/внутриутробные;
  • половые, включая герпес- и папилломавирус, TORCH;
  • инфекции органов дыхания и кишечника;
  • гнойно-септические и нейроинфекции;
  • оппортунистические.

Эффективность PCR-анализа обусловлена его способностью найти возбудителя до клинических признаков болезни, существенно ускорив диагностику и исключив ошибку.

Требования к лаборатории

Они указаны в нормативных документах, которые касаются помещений подобного типа. Например, приложение №16 к «Порядку оказания медпомощи в дерматовенерологии» (дополняющее Приказ №924 Минздрава РФ) описывает стандарты оборудования для лаборатории, действующей в кожно-венерологическом диспансере.

Рабочие зоны

Под разные стадии ПЦР-анализа отводятся свои зоны, и первой из них становится площадка, где производят первичную обработку материала. Здесь его принимают, регистрируют, сортируют, затем наносят маркировку и хранят. Кроме того, в лаборатории предусмотрены и другие основные зоны.

Выделение ДНК

Рекомендуется обустраивать эту зону обособленно, но при отсутствии свободной площади (не менее 15–20 кв. м.) возможно её совмещение с площадками, предназначенными для иных, за исключением генно-инженерных, целей. В этом случае оборудуют PCR-бокс только под полимеразную цепную реакцию.

Анализ и приготовление смесей

В этой комнате (площадью от 15 до 20 кв.м.) готовят реакционные смеси, а также отправляют в пробирку для PCR-анализа препараты ДНК, реже РНК. Лучше развести оба этапа по двум комнатам. Если это невозможно, для каждого из них оборудуют автономный бокс.

Детекция

Под неё приспосабливают обособленный отсек размером около 25–30 кв.м., где есть ПЦР-бокс. Для детекции применяют гибридизационный анализ с электрофорезом, отводя для каждого свои посуду и расходные материалы. При параллельном использовании обоих способов потребуется сектор, где делают только гибридизационный анализ. Место под детекцию не нужно, если в лаборатории освоен real-time PCR.

Дополнительные помещения

К ним относятся:

  • архив, где хранится документация;
  • гардероб, санузел;
  • комнаты, где отдыхает/обедает персонал;
  • складское помещение;
  • кабинет заведующего.

Чтобы обеззаразить анализируемые фрагменты, потребуется обустроить автоклавную. При недостатке площадей её совмещают с одним из лабораторных подразделений.

Технические требования

ПЦР-лаборатория, обязана (наряду с регламентированным зонированием) иметь:

  • водопровод с канализацией;
  • кондиционеры;
  • свет (естественный/искусственный);
  • электричество с отоплением;
  • вентиляцию;
  • систему тушения пожара.

Следует исключить обмен воздухом между сектором детекции и прочими лабораторными секторами.

Отделка

Полы требуют противоскользящего покрытия (без стыков/зазоров), который выдерживает обработку химическими реагентами, в том числе дезинфицирующими жидкостями. Аналогичные требования предъявляют к потолку и стенам – они должны легко отмываться и не иметь трещин. Исполняя Указания по использованию бактерицидных ламп для обеззараживания воздуха/поверхности внутри помещений, во всех рабочих зонах монтируют бактерицидные облучатели, рассчитывая их мощность по метражу.

Оборудование и мебель

ПЦР-лабораторию оснащают системами для гель-электрофореза (отображающей результаты) и гель-документации (анализирующей эти результаты). В перечень включены как бытовой, так и низкотемпературный (до минус 80°С) холодильники, а также центрифуга-встряхиватель и центрифуга для пробирок.

Кроме того, необходимы устройства:

  • амплификатор, насос с колбой-ловушкой;
  • твердотельный термостат Eppendorf;
  • трансиллюминатор, бокс (настольный) для ПЦР;
  • прибор для электрофореза (горизонтального);
  • устройство, считывающее результаты исследования на ДНК-чипах;
  • камера для гибридизации;
  • оборудование для ПЦР-анализа в реальном времени;
  • комплекты пипеточных дозаторов (одно- и восьмиканальных).

В PCR-лаборатории ставят специальную мебель – стулья, столы рабочие, тумбы, стеллажи, шкафы (под посуду, документацию, материалы и не только). Лабораторная мебель должна быть не только эргономичной и долговечной, но и противостоять агрессивным, по преимуществу химическим, веществам.

Основные термины (генерируются автоматически): PCR, TORCH, зона, лаборатория, цепная реакция.


Похожие статьи

Улучшение качества обследования пациентов с помощью...

Полимеразно-цепная реакция в настоящее время является наиболее совершенным методом клинической лабораторной диагностики.

Для ПЦР- обследования применяется несколько специально разработанных методик. Лаборатория ПЦР диагностики ГУЗ «СГКБ № 10»...

Интенсификация селекционного процесса в животноводстве...

Полимеразная цепная реакция в настоящее время является наиболее совершенным

С 90-х годов 17 лабораториями из 9 стран реализуется программа картирования генома свиньи

Основные термины (генерируются автоматически) : цепная реакция, MAS, QTL, PCR...

Надежность ПЦР-анализа при обнаружении m.tuberculosis...

Материалы и методы исследования: Исследования проводилась в Национальной Референс лаборатории Республиканского специализированного научно-практического медицинского центра Фтизиатрии и Пульмонологии в г. Ташкент. Для достижения поставленной цели было...

Основные методы определения ГМО в продукции

В данной статье описываются значение определения ГМО в продукции, причины разработок методов определения и мониторинга ГМО в продукции. Также рассмотрены характеристики основных методов, которыми пользуются при определении ГМО в продуктах питания.

Состояние перекисного окисления липидов у овец, вызванных B. ovis

В статье приведены данные по исследованию клинико-патогенетических особенностей бруцеллеза мелкого рогатого скота вызванного B. ovis, с точки зрения окислительно-восстановительных процессов протекающих в организме больного животного.

STR-локусы в генетической дактилоскопии Felis catus L.

Микросателлитные фрагменты выявляют методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), обеспечивающим амплификацию — многократное увеличение копий данного фрагмента ДНК. Синтез этого фрагмента инициируется ДНК-затравками в виде пары праймеров, синтетических...

Сопоставимость разных методов диагностики токсоплазмоза...

Реакцию связывания комплимента выполняли с применением набора диагностикумов (НПФ «Биоцентр», Омск). Результаты реакции считывали визуально и оценивали в крестах или в задержке гемолиза эритроцитов согласно «Методическим указаниям по лабораторной...

Isolation and identification of factors affecting antimicrobial compound...

Genotyping: all polymophisms were found with use of polymerase chain reaction (PCR) and restriction analysis.

инфекциями в последнее время является актуальным в связи с тем, что выработка этих антител является неспецифической защитной реакцией против патогенов.

Изменения в представлении о патогенезе Ph-негативных...

При помощи современных молекулярно-генетических методов (аллель-специфическая полимеразная цепная реакция (ПЦР), пиросеквенирование, количественная ПЦР в реальном времени) удалось определить частоту встречаемости мутации Jak 2 V 617 F при различных...

Создание новых резистентных форм Oryza sativa l. к Magnaporthe...

В местной зоне рисосеяния возможно возделывание сортов, созревающих не

В текущем 2013 году в условиях полевого опыта на рисовой оросительной системе ВНИИ риса лабораторией защиты риса был

Оценку осуществляют, учитывая два показателя: тип реакции (в баллах)...

Похожие статьи

Улучшение качества обследования пациентов с помощью...

Полимеразно-цепная реакция в настоящее время является наиболее совершенным методом клинической лабораторной диагностики.

Для ПЦР- обследования применяется несколько специально разработанных методик. Лаборатория ПЦР диагностики ГУЗ «СГКБ № 10»...

Интенсификация селекционного процесса в животноводстве...

Полимеразная цепная реакция в настоящее время является наиболее совершенным

С 90-х годов 17 лабораториями из 9 стран реализуется программа картирования генома свиньи

Основные термины (генерируются автоматически) : цепная реакция, MAS, QTL, PCR...

Надежность ПЦР-анализа при обнаружении m.tuberculosis...

Материалы и методы исследования: Исследования проводилась в Национальной Референс лаборатории Республиканского специализированного научно-практического медицинского центра Фтизиатрии и Пульмонологии в г. Ташкент. Для достижения поставленной цели было...

Основные методы определения ГМО в продукции

В данной статье описываются значение определения ГМО в продукции, причины разработок методов определения и мониторинга ГМО в продукции. Также рассмотрены характеристики основных методов, которыми пользуются при определении ГМО в продуктах питания.

Состояние перекисного окисления липидов у овец, вызванных B. ovis

В статье приведены данные по исследованию клинико-патогенетических особенностей бруцеллеза мелкого рогатого скота вызванного B. ovis, с точки зрения окислительно-восстановительных процессов протекающих в организме больного животного.

STR-локусы в генетической дактилоскопии Felis catus L.

Микросателлитные фрагменты выявляют методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), обеспечивающим амплификацию — многократное увеличение копий данного фрагмента ДНК. Синтез этого фрагмента инициируется ДНК-затравками в виде пары праймеров, синтетических...

Сопоставимость разных методов диагностики токсоплазмоза...

Реакцию связывания комплимента выполняли с применением набора диагностикумов (НПФ «Биоцентр», Омск). Результаты реакции считывали визуально и оценивали в крестах или в задержке гемолиза эритроцитов согласно «Методическим указаниям по лабораторной...

Isolation and identification of factors affecting antimicrobial compound...

Genotyping: all polymophisms were found with use of polymerase chain reaction (PCR) and restriction analysis.

инфекциями в последнее время является актуальным в связи с тем, что выработка этих антител является неспецифической защитной реакцией против патогенов.

Изменения в представлении о патогенезе Ph-негативных...

При помощи современных молекулярно-генетических методов (аллель-специфическая полимеразная цепная реакция (ПЦР), пиросеквенирование, количественная ПЦР в реальном времени) удалось определить частоту встречаемости мутации Jak 2 V 617 F при различных...

Создание новых резистентных форм Oryza sativa l. к Magnaporthe...

В местной зоне рисосеяния возможно возделывание сортов, созревающих не

В текущем 2013 году в условиях полевого опыта на рисовой оросительной системе ВНИИ риса лабораторией защиты риса был

Оценку осуществляют, учитывая два показателя: тип реакции (в баллах)...

Задать вопрос