Экспрессия цитокератина 7 эпителиоцитами шейки матки у женщин с миомами матки



Иммуногистохимическим методом выявлялся уровень экспрессии ЦК7 в железистом и многослойном плоском эпителии шейки матки у женщин с миомами матки. Поражение шейки матки (экзо- и эндоцервикса) у женщин с миомами матки носило более тяжелый характер по сравнению с женщинами контрольной группы. У женщин с миомами экспрессия ЦК7 эпителиоцитами шейки матки, в обычных условиях выявляемая в клетках желез и их протоков, проявлялась в железах с признаками аденоакантоза, гиперплазии и псевдоплоскоклеточной метаплазии и дисплазии, а также в эпителиоцитах многослойного плоского эпителия, особенно в участках с признаками дисплазии. Все это должно учитываться при обследовании женщин с миомами матки, особенно при выявлении у них фоновых и предраковых заболеваний шейки матки. Особую важность это приобретает в случаях, когда у таких женщин обнаруживаются также признаки инфекции вирусом папилломы человека. Таким образом, обследование должно носить комплексный характер и в обязательном порядке предусматривать патогистологическое исследование, дополненное иммуногистохимическим.

Ключевые слова: цитокератин 7, иммуногистохимия, миома матки, шейка матки, фоновые процессы, предраковые процессы

Цитокератин 7 (ЦК7) относится к нейтрально-основной группе промежуточных филаментов (ПФ) или тканеспецифических белков, имеющих молекулярную массу 52,5–68 кДа, куда входят еще цитокератины № 1–6 и 8. В норме он экспрессируется клетками переходного эпителия мочевыводящих путей, призматического (секреторного) эпителия желез и их протоков, а также клетками мезотелия [1]. Поэтому во многих случаях он используется для определения происхождения опухолей и их метастазов, развившихся из вышеперечисленных видов эпителия. Сюда относятся иммуногистохимические исследования на тканях опухолей мочевого пузыря [15], желудка [22], легкого [21] и в том числе метастазов [13]. ЦК7 используется также для проведения дифференциальной диагностики, например, между плоскоклеточным и железистым раком легкого [27]. Особо интересными в этом плане являются исследования органов и тканей, в которых изначально (в норме) имеются и железистый и плоский эпителий. Так, авторы отмечают экспрессию этого протеина в клетках железистого и плоского эпителия пищевода [18] и анального региона [23]. Обнаружена экспрессия этого протеина и при раке желудка с плоскоклеточным компонентом [22] или в случае плоскоклеточной трансформации эпителия щитовидной железы при раке этого органа [12]. Другие исследователи наблюдали подобную экспрессию и в железистом эпителии эндоцервикса, и в плоском эпителии экзоцервикса, а также в регенераторном псевдоплоскоклеточном эпителии шейки матки [16,17].

Ранее считалось, что плоскоклеточный рак встречается в шейке матки в подавляющем количестве случаев [2]. В последнее время, однако, отмечается рост железистого рака (аденокарциномы) шейки матки [4,25]. Цитокератиновый фенотип аденокарциномы включает, в том числе и ЦК7, который характерен для резервных и призматических клеток слизистой оболочки эндоцервикса. Сходство кератинового набора резервных клеток и клеточных элементов аденокарциномы эндоцервикса может служить по мнению Smetds еt аl. [24], веским доказательством резервноклеточного происхождения железистых раков шейки матки. В пользу такого предположения говорят также многочисленные факты выявления раковых опухолей с двойной (железисто-плоскоклеточной) дифференцировкой [5]. Кроме того, не исключается возникновение рака на фоне не только собственно предраковых (дисплазия, особенно тяжелой степени), но и фоновых состояний и заболеваний шейки матки, среди которых можно особо выделить аденоакантоз и гиперплазию железистых клеток [8,14]. Многие авторы отмечают при этом, что он часто возникает в железах у места стыка (переходной зоны) многослойного плоского и железистого эпителия шейки матки [10,16].

Несмотря на все накопившиеся данные, в научной литературе нет указаний на исследования иммуногистохимического характера по определению характера повреждения эпителиальной ткани, в том числе и опухолевой природы, в шейке матки у пациенток с миомами матки. В то же время в одном из исследований клинического характера подчеркивается актуальность проблемы изучения состояния шейки матки у больных лейомиомой, определяемая тем, что как миома матки, так и заболевания шейки матки являются наиболее часто встречаемыми гинекологическими заболеваниями женских половых органов [9].

Цель работы. Выявить уровень экспрессии ЦК7 в железистом и многослойном плоском эпителии шейки матки у женщин с миомами матки и определить возможные изменения фенотипа эпителиоцитов, в первую очередь многослойного плоского эпителия у этих пациенток, которые в последующем могли бы способствовать развитию здесь более тяжелых видов патологии, в том числе опухолей.

Материал иметоды исследования. Ретроспективно был проанализирован валовый биопсийный и аутопсийный материал, присланный в Центральное патологоанатомическое учреждение на гистологическое исследование из разных клиник города Ашгабата в 2011–2015 годах. I группу (основную) составил материал пациенток с патологией шейки матки с миомами матки (n=56). Их средний возраст составил 33,4±5,6 лет. Для сравнения были исследованы ткани шейки матки у женщин без миом (II группа, n=62) со средним возрастом 32,6±6,4 лет. Кусочки ткани шейки матки из места перехода (стыка) одного эпителия в другой размером 1,0х1,0см фиксировались в 10 % буферном растворе формалина (с нейтральной реакцией рН) и заливались в парафин. Из парафиновых блоков готовились срезы толщиной 4 мкм, которые красились гематоксилином и эозином по стандартному протоколу. Далее выставлялся патогистологический диагноз согласно критериям Кондрикова (2008) [3]. Затем на параллельно приготовленных из парафиновых блоков срезах толщиной также 4 мкм было проведено иммуногистохимическое исследования с антителом против ЦК7. Исследование было проведено согласно рекомендациям производителя (Dako, Дания) на аппарате AutostainerLink 48. Использовалось антитело против цитокератина 7 (ЦК7 или CK7, клон: OV-TL 12/30, готовое к употреблению или ready-to-use). Результаты иммуногистохимического исследования, учитывавшего положительное цитоплазматическое окрашивание клеток в виде Score-показателя, были подсчитаны с помощью полуколичественного метода по Remmele и Stegner (1988) [20]. Score-показатель является при этом значением, полученным при умножении среднеарифметической цифры интенсивности окраски клеток (от 0 до 3) на индекс (среднеарифметическую цифру, от 0 до 4) количества окрашенных клеток на основе изучения 20 произвольных полей зрения для каждого случая. Полученные данные были статистически обработаны с помощью t-теста стандартного пакета программ Windows 2010.

Результат исследования. При стандартном патоморфологическом исследовании женщинам I и II групп был выставлен патогистологический диагноз. У женщин I группы по сравнению со II было обнаружено статистически достоверное преобладание по частоте хронических экзо- и эндоцервицитов, цервикозов (особенно пролиферирующих), аденоакантозу и резервноклеточной гиперплазии желез, дисплазии многослойного плоского эпителия. По другим показателям (полипам канала шейки матки, гипер- и паракератоз, а также акантоз плоского эпителия и других) достоверных отличий обнаружено не было. При иммуногистохимическом исследовании были обнаружены следующие результаты (табл.).

Таблица

Сравнительные результаты иммуногистохимического исследования положительно окрашенных клеток (цитоплазматическое окрашивание) ввиде Score-показателя

№	Признак	Основная группа, n=56 (M±m)	Контрольная группа, n=62 (M±m)	p-показатель
1.	Score-показатель клеток железистого эпителия эндоцервикса (железы без признаков аденоакантоза)	11,15±1,62	11,38±2,02	n.s.
2.	Score-показатель клеток железистого эпителия эндоцервикса (железы с признаками аденоакантоза)	10,68±1,28	7,42±0,65	P<0,05
3.	Score-показатель клеток железистого эпителия эндоцервикса (железы с признаками псевдоплоскоклеточной метаплазии)	7,25±0,87	5,03±0,45	P<0,05
4.	Score-показатель клеток железистого эпителия эндоцервикса (железы с признаками дисплазии)	10,71±1,53	5,21±0,61	P<0,01
5.	Score-показатель клеток многослойного плоского эпителия экзоцервикса	6,18±0,81	1,06±0,07	P<0,001
6.	Score-показатель клеток многослойного плоского эпителия экзоцервикса с признаками дисплазии	9,84±1,7	1,34±0,09	P<0,001
7.	Score-показатель стромальных клеток	0,0±0,0	0,0±0,0	n.s.

Статистически достоверная разница в экспрессии ЦК7 была выявлена со стороны клеток железистого эпителия эндоцервикса, находящихся у места перехода многослойного эпителия в железистый в железах с признаками гиперплазии (рис.1), псевдоплоскоклеточной метаплазии (рис.2,3), аденоакантоза (рис.4) и дисплазии (рис.5).

Рис. 1. Женщина 51 года из I группы. Железа с признаками гиперплазии (бóльшая часть). И обычные аденоциты и таковые в зоне гиперплазии коричнево (положительно) окрашены на ЦК7. Увеличение х390.

Рис.2. Женщина 41 года из I группы. В центре железа с псевдоплоскоклеточной метаплазией, клетки которой коричнево (положительно) окрашены на ЦК7. В других железах ожидаемая положительная окраска на ЦК7 со стороны обычных аденоцитов. Увеличение х80.	Рис.3. Женщина 39 лет из II группы. В железах ожидаемая положительная окраска (клетки коричнево окрашены) на ЦК7 со стороны обычных аденоцитов. Увеличение х80.

Рис.4. Женщина 53 лет из I группы. В центре крупная железа с признаками аденоакантоза (псевдоплоские клетки, «сидящие» на базальной мембране, поджимают железистые клетки и отодвигают их к центру железы, то есть к просвету; там же образуются балки). И обычные аденоциты и таковые в зоне гиперплазии коричнево (положительно) окрашены на ЦК7. Увеличение х280

Рис.5. Женщина 43 лет из I группы. В центре крупная железа с признаками дисплазии средне-тяжелой степени. Обычные аденоциты этой и соседней желез менее интенсивно окрашены на ЦК7, в то время как окраска железистых клеток в состоянии дисплазии (вверху и частично справа) резко положительна. Увеличение х390.

Разница в экспрессии ЦК7 со стороны клеток многослойного эпителия также была достоверной (рис.6,7). При этом она была более выраженной, чем в эпителиоцитах эндоцервикса. Тем не менее, особое внимание привлекает к себе тот факт, что еще бóльшая достоверная разница в экспрессии была обнаружена в многослойном плоском эпителии с признаками дисплазии (рис.8). Разницы в экспрессии ЦК7 со стороны клеток стромы как эндоцервикса, так и экзоцервикса обнаружено не было.

Рис.6. Женщина 45 лет из I группы. Зона трансформации. Слева — железистый эпителий, справа — многослойный плоский (МПЭ). В МПЭ многие клетки коричнево окрашенные — положительные клетки на ЦК7. В строме выраженное хроническое воспаление. Увеличение х80.	Рис.7. Женщина 48 лет из II группы. Зона трансформации. Справа — железистый эпителий, слева — многослойный плоский (МПЭ). В МПЭ — положительные окрашенных клеток на ЦК7 не обнаружено. В строме выраженное хроническое воспаление. Увеличение х80.

Рис.8. Женщина 49 лет из I группы. Вверху мнослойный плоский эпителий в состоянии тяжелой дисплазии (карцинома in situ). Отдельные клетки его (слева и единичные справа) практически не окрашены, в то время как большай часть клеток интенсивно положительно окрашены на ЦК7. Внизу рисунка видна железа с почти закрытым просветом и положительно окрашенными на ЦК7 аденоцитами. Увеличение х390

Обсуждение ивыводы. Поражение шейки матки (экзо- и эндоцервикса) у женщин с миомами матки носило более тяжелый характер по сравнению с женщинами контрольной группы. Особо настораживает тот факт, что у женщин с миомами экспрессия ЦК7 эпителиоцитами шейки матки, в обычных условиях выявляемая в клетках желез и их протоков, проявляется в железах с признаками аденоакантоза, гиперплазии и псевдоплоскоклеточной метаплазии и дисплазии, а также в эпителиоцитах многослойного плоского эпителия, особенно в участках с признаками дисплазии. Эпителий шейки матки является одним из наиболее частых мест формирования раковых опухолей у женщин. Внешние факторы (вирус папилломы человека) наряду с генетическими (наследственными) факторами могут играть определенную роль в возникновении рака этой локализации [6]. Известно, что в результате даже банального воспалительного процесса (экзо- и эндоцервицит) может нарушиться процесс замещения цилиндрического эпителия на многослойный плоский при, например, эктопии шейки матки и это может способствовать развитию различных патологических ее состояний [3]. В развитие плоскоклеточного рака могут быть вовлечены повреждения в механизмах контроля процессов гиперплазии эпителия и (псевдо)плоскоклеточной метаплазии [8]. Наши наблюдения могут свидетельствовать об изменении фенотипа клеток МПЭ и приобретении ими отдельных свойств железистых или резервных клеток, дающих положительную реакцию на ЦК7, более выраженных у женщин с миомами. В этом плане наши результаты коррелируют с мнением других авторов, высказывавших предположение, что несмотря на свою специфичность к цилиндрическому эпителию, ЦК7 может экспрессироваться и клетками плоского эпителия в случаях, когда вследствие каких-либо причин происходит изменение фенотипа этих клеток [19,26]. Это можно объяснить тем фактом, что камбиальные клетки эпителия, за счет которых происходит регенерация эпителиоцитов при различного рода повреждениях, являются бипотентными [3]. Они могут дифференцироваться как в клетки многослойного плоского эпителия, образуя очаги псевдоплоскоклеточной метаплазии, так и клетки железистого эпителия с бόльшим риском развития в последствии аденоакантоза и прочих изменениях патологического характера, наблюдаемых преимущественно у женщин с миомами. Кроме того, по самым современным данным, не исключается роль в патогенезе патологии шейки матки самого ЦК7 [17].

Все это должно учитываться при обследовании женщин с миомами матки, особенно при выявлении у них фоновых и предраковых заболеваний шейки матки. Особую важность это приобретает в случаях, когда у таких женщин обнаруживаются также признаки инфекции вирусом папилломы человека. Таким образом, обследование должно носить комплексный характер и в обязательном порядке предусматривать патогистологическое исследование, дополненное иммуногистохимическим. Последнее, за счет своей высокой специфичности благодаря сродству применяемого антитела к антигену в тканях, позволит с большей достоверностью ставить патогистологический диагноз. Ведь основными направлениями в проблеме рака шейки матки является его профилактика за счет ранней диагностики фоновых и предраковых заболеваний, так как злокачественные поражения шейки матки редко возникают на неизмененном эпителии.

Литература:

1. Бабиченко И. И., Ковязин В. А. Новые методы иммуногистохимической диагностики опухолевого роста: Учеб. пособие. // М.: РУДН. — 2008. — 109 с.
2. Бебнева Т. Н. Клинико-морфологические особенности шейки матки при папилломавирусной инфекции. // Автореф. дисс. канд. мед. наук. — Москва, 2001.
3. Кондрикoв Н. И. Патология матки.// М., Практическая медицина. — 2008. — 334 с.
4. Новик В. И. Эпидемиология и профилактика рака шейки матки. // Медлайн-экспресс. 2008. — № 5.-С. 36–41.
5. Петров С. В., Райхлин. Н. Т. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека. // Казань, «Титул». — 2004. — С.117–124.
6. Роговская С. И. Папилломавирусная инфекция нижних отделов гениталий: клиника, диагностика, лечение. // Автореф. дисс. доктора мед. наук. — Москва, 2003.
7. Русакевич П. С., Гришанович Р. В.. Системный функциональный подход к диагностике и лечению вирусных изменений цервикса. // Сибирский онкологический журнал. — 2011. — № 3(45). — С.22–28.
8. Сидорова И. С., Леваков С. А. Фоновые и предраковые процессы шейки матки. // М.: Медицинское информационное агентство, 2006. — 96 с.
9. Шиляев А. Ю. Клиника, диагностика и лечение патологии шейки матки у больных с миомой матки. // Автореф. дисс. канд. мед. наук. — Москва, 2009.
10. Anand.M, Deshmukh S. D., Gulati H. K. Papillary squamotransitional cell carcinoma of the uterine cervix: A histomorphological and immunohistochemical study of nine cases. // Indian J Med Paediatr Oncol. — 2013. — Apr-Jun;34(2). — P.66–71.
11. Azevedo R. S., de Almeida O. P., Kowalski L. P., Pires F. R. Comparative Cytokeratin Expression in the Different Cell Types of Salivary Gland Mucoepidermoid Carcinoma/ // Head Neck Pathol. — 2008. — Dec;2(4). — P.257–264.
12. Eom T. I., Koo B. Y., Kim B. S., Kang K. H., Jung S. K., Jun S. Y., Bae H. S., Kim L. S. Coexistence of primary squamous cell carcinoma of thyroid with classic papillary thyroidcarcinoma. // Pathol Int. — 2008. — Dec;58(12). — P.797–800.
13. Gruver A. M., Amin M. B., Luthringer D. J., Westfall D., Arora K., Farver C. F., Osunkoya A. O., McKenney J. K., Hansel D. E. Selective immunohistochemical markers to distinguish between metastatic high-grade urothelialcarcinoma and primary poorly differentiated invasive squamous cell carcinoma of the lung. // Arch Pathol Lab Med. — 2012. — Nov;136(11). — P.1339–1346.
14. Kerdraon O., Cornélius A., Farine M. O., Boulanger L., Wacrenier A. Adenoid basal hyperplasia of the uterine cervix: a lesion of reserve cell type, distinct from adenoid basal carcinoma. // Hum Pathol. — 2012. — Dec;43(12). — P.2255–2265.
15. Kim M., Ro J. Y., Amin M. B., de Peralta-Venturina M., Kwon G. Y., Park Y. W., Cho Y. M. Urothelial eddies in papillary urothelial neoplasms: a distinct morphologic pattern with low risk for progression. // Int J Clin Exp Pathol. — 2013. — 6(8). — P.1458–1466.
16. Koenig C., Turnicky R. P., Kankam C. F., Tavassoli F. A. Papillary squamotransitional cell carcinoma of the cervix: a report of 32 cases. // Am J Surg Pathol. — 1997. — Aug;21(8). — P.915–921.
17. Lee Ho., Lee Hye., Cho Y. K. Cytokeratin7 and cytokeratin19 expression in high grade cervical intraepithelial neoplasm and squamous cell carcinoma and their possible association in cervical carcinogenesis. // Diagn Pathol. — 2017. — Vol.12. — P.18–24.
18. Oue N., Noguchi T., Anami K., Kitano S., Sakamoto N., Sentani K., Uraoka N., Aoyagi K., Yoshida T., Sasaki H., Yasui W. Cytokeratin 7 is a Predictive Marker for Survival in Patients with Esophageal Squamous Cell Carcinoma. // Annals of Surgical Oncology. — 2012. — Vol.19, Issue 6. — P.1902–1910
19. Pulitzer M., Desman G., Busam K. J. CK7 expression in primary cutaneous squamous cell carcinoma. // J Cutan Pathol. — 2010. — Sep;37(9). — P.966–972.
20. Remmele W., Stegner H. E. Recommendation for uniform definition of an immunoreactive score (IRS) for immunohistochemical estrogen receptor detection (ER-ICA) in breast cancer tissue. // Pathologe. — 1987. — № 8. — Р.138–140.
21. Roy S., Nandi A., Das I., Mandal P. K. Comparative study of cytology and immunocytochemistry with trucut biopsy and immunohistochemistry in diagnosis of localized lung lesions: A prospective study. // J Cytol. — 2015. — Apr-Jun;32(2). — P.90–95.
22. Saito S., Hosoya Y., Morishima K., Ui T., Haruta H., Kurashina K., Meguro Y., Zuiki T., Sata N., Fujii H., Matsubara D., Niki T., Lefor A. T., Yasuda Y. A clinicopathological and immunohistochemical study of gastric cancer with squamous cell carcinoma components: a clinically aggressive tumor. // J Dig Dis. — 2012. — Aug;13(8). — P.407–413.
23. Sakamoto T., Konishi F., Yoshida T., Yoshinaga Y., Izumo T., Lefore A. Adenocarcinoma arising from an anal gland — Report of a case. // Int J Surg Case Rep. — 2014. — Vol.5(5). — P.234–236.
24. Smedts F., Ramaekers F., Trojanovsky S. M. et al. Keratin expression in cervical cancer. // Amer J Pathol. — 1992. — Vol.141. — P.497–511.
25. Wang S. S., Sherman M. E., Hildesheim A. Cervical adenocarcinoma and squamous cell carcinoma incidence trends among white woman and black woman in the United States for 1976–2000. // Cancer. — 2004. — Vol.100. — P.1035–1044.
26. Yamada A., Sasaki H., Aoyagi K., Sano M., Fujii S., Daiko H., Nishimura M., Yoshida T., Chiba T., Ochiai A. Expression of cytokeratin 7 predicts survival in stage I/IIA/IIB squamous cell carcinoma of the esophagus. // Oncol Rep. — 2008. — Nov;20(5). — P.1021–1027.
27. Xu X. Y., Yang G. Y., Yang J. H., Li J. Analysis of clinical characteristics and differential diagnosis of the lung biopsy specimens in 99 adenocarcinoma cases and 111 squamous cell carcinoma cases: utility of an immunohistochemical panel containing CK5/6, CK34βE12, p63, CK7 and TTF-1. // Pathol Res Pract. — 2014. — Oct;210(10). — P.680–685.