Гиполипидемическое свойство вещества на основе фиброина шелка



Становится очевидной эффективность препаратов, оказывающих терапевтическое действие, не вовлекаясь при этом сами в метаболизм, так как метаболиты очень часто оказывают отрицательное воздействие на функцию целого ряда органов. В этой связи особый интерес представляет энтеросорбция, так как энтеросорбенты (ЭС) — это обычно вещества, не перевариваемые в желудочно-кишечном тракте, и в то же время, обладающие большим сродством и сорбционной емкостью к различным токсичным продуктам метаболизма. Однако широкому применению энтеросорбции препятствует недостаточное обеспечение сорбентами вследствие их ограниченного арсенала и производства. С другой стороны, многие рекомендованные ЭС искусственного происхождения не всегда полностью отвечают медицинским требованиям. Поэтому в последние годы внимание многих исследователей обращено на изучение естественных ЭС — пищевых волокон (целлюлоза, гемицеллюлоза, пектины, камеди, слизи), неуглеводные соединения лигнина, пентозаны и другие подобные высокомолекулярные вещества, некоторые аминосахара грибов и ракообразных (хитин), неперевариваемые белки [1, 2, 3, 5]. В связи с вышеизложенными поиск новых сорбентов и их внедрение в практическую медицину является актуальной медико-биологической проблемой.

Целью настоящей работы явилась оценка гиполипидемического действия вещества БС-1 (условное название: Биологический сорбент-1) в in vitro и in vivo условиях.

Материал иметоды исследования. БС-1 был получен в Институте химии и физики полимеров АН РУз из отходов переработки натурального шелка, подвергнутых обработке с 3 и 6 N соляной кислотой в течение 40–60 мин. Конечный продукт — порошок кремового цвета, растворимый в концентрированных минеральных кислотах и некоторых растворах неорганических солей: LiCl, NaCNS, CaCl₂. Молекулярная масса 32300Д, плотность — 1,34–1,43 кг/м³, степень набухания — 50–80 %, насыпной вес — 0,2–0,5 г/см³, механическая прочность — 0,2–0,3 кг.

Предварительно сорбционную емкость вещества БС-1 исследовали в опытах «in vitro». Для изучения сорбционной способности вещества БС-1 связывать холестерин (ХС), стандартный раствор последнего в хлороформе пропускали через колонку, наполненную веществом БС-1. В элюате определяли содержание ХС по [6]. Для проверки десорбции ХС, колонку промывали чистым хлороформом, и в элюате еще раз определяли содержание ХС. Для приближения опыта к условиям, наблюдающимся в кишечнике, были проведены исследования по изучению сорбционной способности ЭС БС-1 к основным компонентам желчи — желчным кислотам (ЖК), ХС и билирубину. При этом использовали дуоденальную желчь человека, полученную при диагностическом зондировании. Для определения процента относительной сорбционной способности БС-1 к навеске сорбента в 10 мг добавляли 0,5 мл дуоденальной желчи. Образцы инкубировали в течение 0,5, 1,0, 2,0 и 3,0 ч при 37° С, постоянно перемешивая содержимое пробирок. Для определения максимальной сорбции изучаемых веществ, к образцам сорбента в 10,0 мг добавляли возрастающие объемы (0,5; 1,0; 1,5 и 2,0 мл) дуоденальной желчи. В обеих случаях сорбент отделяли центрифугированием, и в аликвоте определяли концентрацию ЖК и ХС по [7], билирубина по [9].

Гиперхолестеринемию (ГХС) у крыс вызывали путем ежедневного перорального введения 2 мл смеси спиртового и масляного растворов витамина D₂ из расчета 80 000 ЕД на 100 г массы и ХС в дозе 200 мг/кг в течение 6 дней [4]. В опытной группе животным перорально вводили БС-1 одновременно с ХС и витамином D₂ в дозе 0,5 г/кг. Параллельно изучали липидные показатели у интактных крыс. Животных, находящихся под легким эфирным наркозом, декапитировали на 7-е сут опыта. В сыворотке крови определяли содержание ХС, общих липидов (ОЛ) и триацилглицеринов (ТГ) с помощью тест-наборов фирмы «Lachema», общих фосфолипидов (ОФЛ) по [8].

Статистическую обработку полученных результатов проводили с применением t-критерия Стьюдента.

Результаты исследования. «In vitro» исследования показали, что содержание ХС после пропускания его через колонку, заполненной веществом БС-1, уменьшилось с 200,285,26 до 139,282,73 мкг в исследованном растворе, что составило 69,5 % исходного показателя (табл. 1).

Таблица 1

Сорбция холестерина из стандартного раствора препаратом БС-1

Показатели	Концентрация ХС, мг%
Исходная концентрация	10,01  0,26
После сорбции	6,96  0,14*
После первой промывки	0,501  0,046*
После второй промывки	не определяется

* — достоверно по сравнению с исходным показателем (P<0,05).

С целью оценки степени десорбции ХС, колонку с веществом БС-1 промывали чистым хлороформом. После однократного промывания колонки концентрация ХС в элюате равнялась 0,5010,046 мг %, т. е. десорбировалось 7,2 % ХС, связанного с веществом БС-1 (табл. 1). В элюате полученного после второго промывания колонки хлороформом, ХС не определялся.

В исследованиях по изучению сорбционной способности БС-1 основных компонентов желчи — ЖК, ХС и билирубина, было выявлено, что время инкубации дуоденальной желчи с веществом БС-1 существенно влияет на степень сорбции ХС и ЖК. Так, через 3 ч инкубации наблюдается максимальная сорбция как ХС (57,1 %), так и ЖК (38,5 %) (табл. 2).

Таблица 2

Сорбция ХС иЖК из дуоденальной желчи (0,5 мл) веществом БС-1 (10 мг) вдинамике времени

Время вминутах	ХС, вмг%	ЖК, вмг%
Исходный	4,94  0,34	131,32  6,58
30	3,98  0,28*	92,27  1,45*
60	4,13  0,09*	102,90  2,99*
120	2,52  0,05*	88,00  1,21*
180	2,05  0,07*	80,56  1,87*

* — достоверно по сравнению с исходным показателем (P<0,05).

Приведенные в табл. 3 результаты свидетельствуют, что при добавлении к 10 мг вещества БС-1 возрастающих объемов дуоденальной желчи с постоянной концентрацией исследуемых веществ, самый высокий процент связывания ЖК (84,4 %) наблюдается в объеме желчи равном 0,5 мл. Для ХС этот показатель равнялся 49,1 и 49,9 % в 0,5 мл и 1,0 мл желчи, а для билирубина — 90,3 % при 0,5 мл объема желчи.

Таблица 3

Сорбция ХС, ЖК ибилирубина веществом БС-1 (10 мг) из дуоденальной желчи взависимости от ее объема

Объем желчи, мл	ХС, мкг	ЖК, мкг	Билирубин, мкг
Контроль	51,9  4,50	840,6  11,90	1314,2  18,7
0,5	25,95  0,68	420,3  17,7	657,1  46,2
	13,20  0,35*	65,4  2,75*	64,0  4,49*
1,0	51,90  1,59	840,6  30,43	1314,2  16,9
	26,00  0,79*	152,0  5,50*	139,0  1,79*
1,5	77,85  3,18	1260,9  39,34	1971,3  67,8
	51,30  2,09*	264,4  8,25*	264,4  8,25*
2,0	103,8  1,44	1681,2  38,0	2628,4  162,7
	86,2  1,20*	486,4  11,0*	559,2  34,6*

Примечание: в числителе — до сорбции; в знаменателе — после сорбции.

Проведенные исследования выявили ряд существенных изменений липидного обмена в сыворотке крови у крыс, при их кормлении экзогенным ХС. У животных с ГХС содержание ОЛ было повышено на 228 % по сравнению с нормой. Концентрация ХС также была повышена на 205 % по сравнению с интактным значением. При этом содержание ОФЛ оставалось на уровне интактных животных. Интересным фактом является резкое снижение уровня ТГ. Оно составило всего 29,6 % интактного значения (табл. 4).

Таблица 4

Влияние вещества БС-1 на содержание липидов в сыворотке крови укрыс сГХС

Показатели, вмг%	Интактный	ГХС (контроль)	ГХС + БС-1
Общие липиды	234,78  20,35	535,26  38,36а	384,06  15,14а,б
Холестерин	73,94  4,46	151,93  5,14а	108,15  3,28а,б
Триглицериды	70,81  2,18	20,98  0,78а	35,39  2,28а,б
Фосфолипиды	122,00  9,79	128,24  1,40а	187,14  11,33а,б

Примечание: а — достоверность различий по сравнению с интактным, б — достоверность различий по сравнению с контролем.

При лечении животных с веществом БС-1 содержание ОЛ и ХС статистически значимо снизилось на 28,3 и 28,8 % соответственно по сравнению с контрольными значениями, оставаясь при этом выше интактных значений на 163,5 и 46,3 % соответственно.

Энтеросорбция в течение 6 дней способствовала повышению содержания ФЛ на 53,4 и 45,9 % по сравнению с интактным и контрольным значением соответственно. Наблюдали также повышения уровня ТГ у леченных животных на 68,7 % по сравнению с контрольным значением. При этом по сравнению с нормой оно оставалось сниженным на 50,0 %.

Таким образом, в опытах на крысах, получавших ГХС диету, добавление вещества БС-1 привело к снижению содержания ОЛ, ХС, ТГ в сыворотке крови, что свидетельствует о его гиполипидемического и гипохолестеринемического свойства.

Литература:

1. Андрейчин М. А., Погорила М. А. Лечебная эффективность угольного сорбента СКН П-2 при тяжелой форме вирусного гепатита В // Сорбенты медицинского назначения и механизмы их лечебного действия (тез. докл.). — Донецк, 1988. — С. 45–46.
2. Брискин Б. С., Демидов Д. А. Энтеросорбция пектинсодержащим препаратом в лечении перитоните // Хирургия. Журнал им. Н. И. Пирогова. — 2005. — № 4. — С. 14–19.
3. Брискин Б. С., Савченко З. И., Демидов Д. А. Энтеросорбция и нутритивная поддержка пектинсодержащим препаратом в лечении иммунодефицита при перитоните // Хирургия. Журнал им. Н. И. Пирогова. — 2005. — № 7. — С. 15–18.
4. Василенко Ю. К., Лисевицкая Л. И., Фролова Л. Ш. Гиполипидемическое влияние антиоксидантов производных фенола // Бюл. экс. биол. — 1983. — № 6. — С. 49–50.
5. Вершинин А. С., Попилов А. Н. Энтеросорбция в практике семейного врача // РМЖ. — 2008. — № 4. — С. 166.
6. Меньшиков В. В. Лабораторные методы исследования в клинике. — М.: Медицина, 1987. — 368 с.
7. Мирошниченко В. П., Громашевская Л. Л., Касаткина М. Г., Козачек Г. А. Определение содержание желчных кислот и холестерина в желчи // Лаб. дело. — 1978. — № 3. — С. 149–153.
8. Определение содержания фосфолипидов // Современные методы исследования липопротеидов высокой плотности (метод. рекомен.). — М, 1983. — С. 21–23.
9. Скакун Н. П. Определение содержания билирубина в желчи // Проблемы эндокринологии и гормонотерапии. — 1956. — № 6. — С. 53–55.