Известен феномен торможения миграции лейкоцитов из стеклянного капилляра in vitro [7], капиллярный метод постановки реакции был разработан Soborg M. и Cohen S. [4]. В современной научной и клинической практике феномен торможения миграции лейкоцитов — РТМЛ используется как один из показателей функциональной активности лейкоцитов [5], а также в качестве вспомогательного диагностического теста при неспецифическом миокардите, амилоидозе почек, ХАГ, гломерулонефрите, системных [9] и инфекционных заболеваниях [11]. Тест используется в качестве неинвазивного предиктора колоректального рака [1], в диагностике лекарственной аллергии у больных бронхиальной астмой [2].
Другой не менее известной характеристикой функциональной активности лейкоцитов является их способность к розеткообразованию с эритроцитами барана (ЭБ) [3]. Долгое время реакция розеткообразования лимфоцитов с эритроцитами барана была единственным способом идентификации Т-лимфоцитов человека [6,7]. Численность розеткообразующих лимфоцитов в циркуляции и сейчас остается одним из показателей функциональной активности иммунной системы млекопитающих [10].
Однако в доступной литературе нами не найдено сведений о розеткообразующей активности лейкоцитов, мигрировавших из стеклянного капилляра in vitro.
Целью настоящего исследования являлось изучение способности лейкоцитов, мигрировавших из стеклянного капилляра in vitro, формировать «розетки» с аутологичными эритроцитами и тромбоцитами.
Материалы и методы. Было обследовано 60 практически здоровых лиц (ПЗЛ) (40 женского и 20 мужского пола) в возрасте от 18 до 27 лет. Средний возраст обследованных составил 24,9 ± 1,7 лет. Кровь для исследования забирали из безымянного пальца левой руки обследуемого с соблюдением правил асептики в гепаринизированные капилляры. РТМЛ ставили в модификации одного из авторов [8]. После остановки реакции в камере Горяева под микроскопом (Leika, окуляр х10) определяли численность мигрировавших лейкоцитов. На 100 свободно лежащих лейкоцитов подсчитывали число эритроцитарных, тромбоцитарных и смешанных ауторозеток, число агглютинатов. Результаты подсчета выражали в процентах ( %). Растворимый тканевой антиген яичников (РТАЯ) готовили методом водно-солевой экстракции [7]. Полученные данные математически обработаны при помощи программы SPSS.
Результаты исследования. Было установлено, что спонтанно мигрировавшие из стеклянного капилляра лейкоциты in vitro формируют «розетки» с аутологичными эритроцитами и тромбоцитами, а так же образуют смешанные эритроцитарно-тромбоцитарные «розетки» и агглютинаты (фото 1, 2, 3).
Рис.1. Тромбоцитарные «розетки». А — при спонтанной миграции, Б — при миграции, индуцированной РТАЯ. В поле зрения видны свободно лежащие лимфоциты.
Рис.2 Эритроцитарные «розетки»: А — при спонтанной миграции, Б — при миграции, индуцированной РТАЯ.
Рис. 3 . Агглютинирующие лимфоциты: А — при спонтанной миграции, Б — при миграции, индуцированной РТАЯ
Нами была выявлена зависимость розеткообразующей активности лейкоцитов от пола обследованных (табл.1).
Таблица 1
Количество розеткообразующих клеток среди лейкоцитов, мигрировавших из стеклянного капилляра, в зависимости от пола
|
№п/п |
Группа |
типы розеток и их количество (%) |
агглютинаты (%) |
|||
|
лейкоциты |
РОК тр |
РОК эр |
РОК смеш. |
|||
|
1. |
ж ( n= 40 ) |
84,6±0,6* |
2,2±0,06* |
10,3±0,8* |
1,26±0,09** |
1,6±0,09 |
|
2. |
м (n= 20 ) |
70,75±2,0 |
2,5±0,04 |
23,3±1,75 |
2,00±0,05 |
1,5 ±0,05 |
|
3. |
ЖАГ( n=40) |
70,8±1,6 |
8,4±0,09* |
15,6±1,1* |
2,4±0,07** |
2,8±0,05 |
|
4. |
МАГ(n= 20) |
71,9±2,1 |
3,50±0,7 |
19±0,9 |
3,9±0,1 |
1,7±0,09 |
Примечание: *-p<0,05 ; ** — p<0,01
Как видно из таблицы у женщин число свободных лейкоцитов достоверно выше по сравнению с мужчинами (p<0,05). Однако у мужчин достоверно повышена против женщин численность РОКтр, РОК эр и РОК смеш (p<0,05; 0,05 и 0,01 соответственно). Численность агглютинатов практически одинакова (p>0,05).
Рис. 4. Структура распределения лейкоцитов практически здоровых лиц по их функциональной активности в зависимости от пола (в %)
На наш взгляд диаграмма распределения лейкоцитов практически здоровых лиц по их функциональной активности иллюстрирует эту ситуацию (рис.4). Хорошо видно, что степень увеличения численности РОКтр и РОКсмеш при спонтанной миграции из капилляра у лиц мужского пола значительно выше в сравнение с женщинами. В этой связи мы использовали в качестве индуктора миграции растворимый тканевой антиген яичников (РТАЯ) (рис.5).
Рис. 5. Численность РОК среди лейкоцитов, мигрировавших из стеклянного капилляра, в зависимости от пола
Было установлено, что in vitro в присутствии РТАЯ мигрировавшие из стеклянного капилляра лейкоциты женщин формируют в 3,8 раза больше по сравнению со спонтанной миграцией РОКтр, в 1,5 раза больше РОКэр и в 1,75 раза агглютинатов. В то же время у мужчин в присутствии РТАЯ численность РОКэр достоверно снижается по сравнению со спонтанной миграцией (p<0,05), РОКтр и РОКсмеш — повышается. Но если численность РОКтр у мужчин и женщин повышается в одинаковой степени, то РОКсмеш — в значительно большей (в1,95 раза; p<0,001). При этом, если численность агглютинирующих в присутствии антигена лейкоцитов у мужчин практически не изменяется (p>0,05), то у женщин она увеличивается в 1,8 раза (p<0,05).
Кроме того было установлено, что клеточность «розеток» независимо от пола значительно увеличивается при индукции миграции лейкоцитов РТАЯ (фото 1,2,3). По всей видимости, стимуляция ауторозеткообразования в присутствии РТПЯ у женщин связана с наличием в их циркуляции лимфоцитов, специфически сенсибилизированных к антигену ткани яичников. На наш взгляд феном в целом носит органоспецифический характер.
Выводы
- Мигрировавшие in vitro из стеклянного капилляра лейкоциты обладают способностью к розеткообразованию с аутологичными эритроцитами и тромбоцитами. Феномен носит зависимый от пола характер.
- Внесение в среду культивирования тканевого антигена (в данном случае растворимого тканевого антигена яичников) влияет на экспрессию рецепторов лейкоцитов к аутологичным эритроцитам и тромбоцитам.
- Дифференцированный подсчет численности РОКтр, РОКэр, РОКсмеш и агглютинирующих лейкоцитов может быть использован при определении степени аутосенсибилизации организма практически здоровых лиц к антигенам собственных тканей.
Литература:
- Hugues Legendre M.D, Christine Decaestecker Ph.D., Nathalie Nagy M.D., Alain Hend-lisz M.D.,Max-Peter Schüring Ph.D., Isabelle Salmon M.D., Hans-Joachim Gabius Ph.D., Jean-Claude Pector M.D. and Robert Kiss Ph.D. Prognostic Values of Galectin-3 and the Macrophage Migration Inhibitory Factor (MIF) in Human Colorectal Cancers// Mod Pathol 2003;16 (5):491–504
- Karna T, Chyrek-Borowska S.Leukocyte migration inhibition test in the diagnosis of allergy to antibiotics.// Pol Tyg Lek. 1975 Feb 3;30(5):185-188.
- Khaitov R.M. Immunology. GEOTAR-Media Publishining Group. 2008,255 p.
- Soborg M. Cohen S., Oppenheim J.J. Human lymphocyte migration as a parameter of hy-persensitivity — Acta med. Scand. ,1967, 181, p. 247-25.
- Stanciu L1, Dumitrescu D, Radu D. Applicability of the leukocyte migration inhibition test in the clinical practiceMed Interne. 1990 Oct-Dec; 28 (4):295-303. PMID: 2100874
- Земсков А.М., Земсков В.М., Караулов А.В. Клиническая иммунология. «ГОЭТАР-Медиа». 2008, 426 с.
- Иммунологические методы (под ред. Г. Фримеля). 1987. М:Медицина. 472 с.
- Плескановская С.А. Клеточный и гуморальный иммунный ответ при кожном лейшманиозе (экспериментальные исследования и наблюдения на больных). Автореферат дисс. к.м.н., Москва , 1982.
- Решетникова Л. К. Клиническая иммунология Благовещенск 2009 г.108 стр. (ртмл в клин)
- Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Оценка иммунного статуса человека в норме и при патологии // Иммунология 2001 — № 4 — С. 4-6.
- Чирвон Е. А. Применение реакции торможения миграции лейкоцитов для оценки иммунной системы у больных с инфекционными заболеваниями. Авторефрат дис. кандидата медицинских наук . Москва, 2009. 28 с.
