О способности некоторых лекарственных растений Туркменистана модулировать иммунный ответ лейкоцитов периферической крови экспериментальных животных на тканевые антигены почек in vitro



Проблема фитотерапии бесконечна. Практически нет такой области медицины, в которой не применялась бы терапия препаратами из лекарственных растений. Однако до настоящего времени не существует точного представления о механизме действия фитопрепаратов на ткани организма человека и животных и доли участия в этом процессе иммунной системы. Исследования в этом направлении становятся все более актуальными и все большее число препаратов, полученных из лекарственных растений, пополняют список официальных органо- и иммунопротекторов. К ним относятся иммунал, бальзам Биттнера, большое число гепато-, нефро-, кардиопротекторов. В состав этих препаратов входят экстракты большого числа лекарственных растений в самом различном сочетании [2, 6,7,8].

Народные целители Востока широко использовали и используют отвары лекарственных растений при лечении широкого круга заболеваний. В их число входят и болезни почек. Довольно часто целители Востока при лечении болезней почек используют отвары можжевельника туркменского (Juniperusturcomanica) и верблюжьей колючки (Alhagipersarum) [1].

Однако до настоящего времени нет инвитровой модели изучения характера влияния фитопрепаратов на определенные органы и ткани. Исследования такого рода, на наш взгляд, способствуют развитию не только медицинской фитотерапии, но клинической и трансплантационной иммунологии.

Целью настоящей работы являлось исследование характера влияния отваров некоторых лекарственных растений (ОЛР) Туркменистана — можжевельника туркменского (Juniperus turcomanica) и верблюжьей колючки (Alhagi persarum) на реакцию лейкоцитов крови экспериментальных животных на тканевой антиген почек invitro.

Материалы иметоды исследования. Исследование проведено на 50 белых нелинейных мышах самцах массой не менее 20,0 г. В экспериментах использовали 5 % ОЛР, приготовленные в соответствии с требованиями Фармакопеи [5]. Растворимый тканевой антиген почек (РТАГП) готовили методом водно-солевой экстракции из кусочков тканей асептически извлечённой почки 5 животных. Кусочки почек гомогенизировали с добавлением 2,0 мл ФСБ рН 7,2 в гомогенизаторе Поттера на ледяной подложке. Гомогенат 5-ти кратно замораживали и оттаивали, затем центрифугировали 30 минут при 5000 об/мин. Осторожно отсасывали супернатант, в котором затем определяли концентрацию белка и хранили при -19ºС. РТАГП по рекомендации [3] содержал не менее 20 мкг/мл) белка (по Lowry). Антиген размораживали при комнатной температуре непосредственно перед постановкой реакции. Характер влияния ОЛР на функциональную активность лейкоцитов крови мышей в присутствии РТАГП изучали в реакции торможения миграции в модификации [4], кровь для исследования забирали из хвостовой вены животных, результаты реакции выражали в виде индекса миграции лейкоцитов (ИМЛ, %). Полученные данные математически обработаны на ПК при помощи компьютерной программы SPSS.

Результаты исследования. Исследования показали, что ОЛР способны in vitro как стимулировать (р<0,001), так и тормозить (р<0,001) (вплоть до полной отмены) спонтанную и индуцированную тканевыми антигенами миграцию ЛПК из стеклянного капилляра. Знак модуляции (торможение или стимуляция миграции) и величина индекса миграции ЛПК (ИМЛ) сильно варьируют (рис.1).

Рис. 1. Структура ответа лейкоцитов на присутствие РТАГП invitro

Было установлено, что в 86 % случаев РТАГП тормозит миграцию лейкоцитов мыши из стеклянного капилляра, значительно реже — стимулирует и только в 4 % — не изменяет ее. В целом, ИМЛ в присутствии РТАГП составил 75–87 % (таблица), что свидетельствует о том, что тканевой антиген почек преимущественно тормозит миграцию аллогенных лейкоцитов invitro.

Таблица 1

Величина ИМЛ вприсутствии тканевых антигенов взависимости от отваралекарственного растения

Отвар лекарственного растения	Значения ИМЛ
	При стимуляции миграции	При торможении миграции	в присутствии РТАГП без отвара (контроль)
Juniperusturcomanica	127,3±6,8**	51,3±3,7*	75,7±4,9
Alhagi persarum	160,3±12,7*	49,5±3,6*	87,7±6,1

Примечание: ** -p<0,01; *-p <0,05 по отношению к контролю (лунки с РТАГП, без отваров).

Далее было установлено, что ОЛР при введении в среду совместного культивирования лейкоцитов и РТАГП в соотношении 1:300 значительно влияют на значения ИМЛ (таблица).

При внесении в лунки с антигеном отваров лекарственных растений значения ИМЛ изменяются в обоих случаях, но в присутствии верблюжьей колючки в большей степени, по сравнению с отваром можжевельника туркменского (различие статистически достоверно, p<0,05).

Рис. 2. Структура изменений величины ИМЛ в присутствии отвара можжевельника

Рис. 3. Структура изменений величины ИМЛ в присутствии отвара верблюжьей колючки

Кроме того, отвар верблюжьей колючки тормозит миграцию лейкоцитов в присутствии РАГП на 43,6 %, отвар можжевельника туркменского — на 33 %. Таким образом, отвары лекарственных растений как стимулируют, так и угнетают ответ лейкоцитов крови мышей на РАГП.

На диаграммах 2 и 3 представлена в процентах структура изменений ИМЛ в зависимости от вида ОЛР. Хорошо видно, что 5 % отвары лекарственных растений invitro более чем в половине случаев угнетают реакцию лейкоцитов на РТАГП. Сравнение данных диаграмм показывает, что оба препарата работают практически одинаково. Однако, отвар верблюжьей колючки в большей степени угнетает иммунный ответ лейкоцитов крови мышей на почечный антиген, что можно рассматривать как проявление его нефропротекторного действия.

Таким образом, внесение в среду культивирования лейкоцитов крови мышей и тканевого антигена почек 5 % отваров лекарственных растений — можжевельника туркменского (Juniperusturcomanica) и верблюжьей колючки (Alhagipersarum) в соотношении 1:300 invitro значительно модулируют ответ лейкоцитов на РТАГП и только в 4–6 % случаев — не изменяют его.

Полученные данные, на наш взгляд, в первую очередь свидетельствуют о наличии индивидуальной чувствительности лейкоцитов крови мышей к тканевому антигену почек. У одних животных наблюдается стимуляция миграции лейкоцитов в присутствии РТАГП, у других — торможение. Однако в целом, РТАГП тормозит миграцию лейкоцитов крови мышей из стеклянного капилляра. Кроме того было установлено, что отвары лекарственных растений модулируют ответ лейкоцитов крови мышей на присутствие РТАГП invitro. На основании результатов исследования мы допускаем, что выбранный нами методический подход может быть использован при поиске нефропротекторов среди лекарственных растений, так как анализ полученных данных позволяет говорить, что в основе терапевтического действия отваров можжевельника туркменского (Juniperusturcomanica) и верблюжьей колючки (Alhagipersarum), описываемого целителями Востока при лечении заболеваний почек[2], среди прочих причин лежит их способность управлять иммунным ответом лейкоцитов крови на растворимый тканевой почечный антиген.

Выводы.

1. Лейкоциты периферической крови мышей отвечают на присутствие растворимого тканевого антигена почек в среде культивирования либо торможением, либо стимуляцией миграции из стеклянного капилляра, то есть они обладают чувствительностью к тканевому антигену органа.
2. 5 % отвары можжевельника туркменского (Juniperusturcomanica) и верблюжьей колючки (Alhagipersarum) модулируют invitro ответ лейкоцитов периферической крови мышей на растворимый тканевой антиген почек.
3. Определение invitro характера влияния отваров лекарственных растений на иммунный ответ лейкоцитов крови млекопитающих на растворимые тканевые антигены можно рассматривать как инвитровую модель поиска эффективных нефропротекоторов

Литература:

1. Авиценна (Абу Али ибн Сина) Канон врачебной науки, том II, 1982, Издательство “Фан” Узбекской ССР, 832.
2. Бердымухамедов Г. М. Лекарственные растения Туркменистана. — Ашхабад: Туркменская государственная издательская служба, 2009. — Т.1. — 385 с.
3. Иммунологические методы (под ред Г. Фримеля) Москва:Медицина.1987.472 с.
4. Плескановская С. Иммунологический способ доклинической диагностики и индивидуального подбора лечебных препаратов для лечения заболеваний внутренних органов. Патент № 488 от 03.11.2008. Туркменистан.
5. Фармакопея СССР, 1990. Изд. XI, Т.2. М:Медицина. 348 с.
6. Liagre B, et al. Diosgenin, a plant steroid, induces apoptosis in human rheumatoid arthritis synoviocytes with COX-2 overexpression. Arthritis Research and Therapy 2004; 6(4): 373–383.
7. Ma W, Wang KJ, Cheng CS, Yan GQ, Lu WL, Ge JF, Cheng YX, Li N. Bioactive compounds from Cornus officinalis fruits and their effects on diabetic nephropathy.J. Ethnopharmacol. 2014 May 14;153(3):840–5. doi: 10.1016/j.jep.2014.03.051. Epub 2014 Mar 30.
8. Yingli Wang, Kaixia Xu, Yani Li, Quianjin Feng Fourier transform infrared spectroscopy analysis of the active components in serum of rats treated with Zuogui Pill // Journal of Traditional Chinese Medical Science (2015) 2, 264–269.