Проведено исследование о влиянии апигенина — соединения флавоноидной структуры на антитромботическую функцию сосудистого эндотелия при ишемическом повреждении головного мозга. Эксперимент выполнен на крысах — самцах линии Wistar. Ишемию головного мозга моделировали правосторонней окклюзией средней мозговой артерии. Антитромботическую функцию эндотелия оценивали на модели коллаген — индуцированной агрегации тромбоцитов. Полученные в результате проведения эксперимента данные показывают, что на фоне ишемии головного мозга наблюдается повышение степени (на 80,6 % (P>0,05)), скорости (на 125,4 % (P>0,05)) и показателя (на 47,1 % (P>0,05)) агрегации тромбоцитов. Применение апигенина позволило скорректировать возникшую эндотелиальную дисфункцию. При этом наблюдалось снижение, относительно группы животных негативного контроля степени агрегации — на 69,6 % (P>0,05), скорость и показатель агрегации тромбоцитов — в 2,27 (P>0,05) и в 2,01 раза (P>0,05) соответственно. При этом эффект от применения апигенина был сопоставим с таковым от применения препарата сравнения — сулодексида.
Ключевые слова: эндотелий, ишемия, агрегация тромбоцитов, апигенин.
Ишемический инсульт — серьезное патологичекое состояние с высоким уровнем летальности и инвалидизации населения. Патогенез ишемического повреждения головного мозга сложен и многогранен. По литературным данным одним из ведущих патогенетических звеньев ишемического инсульта являются процессы тромбообразования [3]. При этом снизить повышенный тромбогенный потенциал крови возможно нормализацией функциональной активности сосудистого эндотелия в норме продуцирующего значительное количество антиагрегантных факторов, и дисфункция которого наблюдается на фоне ишемии головного мозга [1, 2]. В связи с этим коррекция дисфункции эндотелия может считаться одним из перспективных направлений терапии ишемических повреждений головного мозга, а поиск веществ, обладающих эндотелитропной активностью становиться актуальной задачей современной медицинской химии и фармакологии [1].
Цель исследования: изучить влияние апигенина на антитромботическую функцию сосудистого эндотелия на фоне фокальной ишемии головного мозга
Материалы иметоды: эксперимент выполнен на 50-ти крысах — самцах линии Wistar массой 240–260 грамм, разделенных на 5 равных экспериментальных групп, по 10 особей в каждой. Перед началом исследования животные прошли 14-ти дневный карантин. Содержание, и все проводимы с животными манипуляции, соответствовали требованиям Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей (Strasbourg, 22 June, 1998.).
Первую экспериментальную группу составили ложнооперированные животные (Л/О). У четырех оставшихся групп животных воспроизводили ишемическое повреждение головного мозга (ИГМ). ИГМ моделировали путем окклюзии правой средней мозговой артерии (СМА), методом коагуляции (с помощью десмокоагулятора собственной конструкции) под местом пересечения СМА с обонятельным трактом [1]. В качестве препарата сравнения использовали сулодексид (Вессел Дуэ Ф, Alfa Wasserman, Италия). Исследуемое соединение — апигенин и препарат сравнения вводились per os непосредственно после оперативного вмешательства и на протяжении 3-х дней ишемического периода в дозе: апигенин — 100 мг/кг и сулодексид — 30 ЕВЛ (единицы высвобождения липопротеинлипазы). Группа крыс негативного контроля (НК) получала 0,9 % раствор хлористого натрия в эквиобьемном количестве. По истечении указанного временного периода проводили оценку влияния исследуемых соединений на антитромботическую функцию сосудистого эндотелия.
Антитромботическую функцию эндотелия оценивали по способности тромбоцитов к агрегации. В качестве индуктора агрегации использовали коллаген (1мг/мл). Процесс агрегации тромбоцитов регистрировали на двухканальном лазерном анализаторе агрегации АЛАТ-2 «БИОЛА» (НПФ «БИОЛА», Россия), методом определения относительного среднего размера агрегатов. При этом определяли степень, скорость и показатель агрегации тромбоцитов. Результаты опытов обрабатывали методом вариационной статистики с использованием пакета прикладных программ STATISTICA 6.0 (StatSoft, Inc., США для операционной системы Windows). Вычисляли среднее значение и стандартную ошибку среднего значения (M±m). Полученные данные проверяли на нормальность распределения с использованием критерия Шапиро — Уилка. В случае нормального распределения данных для сравнения средних использовали t-критерий Стьюдента. При ненормальном распределении результатов эксперимента дальнейшую статистическую обработку данных проводили с использованием U- критерия Манна-Уитни.
Результаты иобсуждение.
Анализируя показатели коллаген — индуцированной агрегации тромбоцитов у ложнооперированных крыс были получены следующие результаты. Степень агрегации тромбоцитов у данной группы крыс составляла 1,488±0,831 ус.ед., скорость и показатель агрегации тромбоцитов принимали значения 1,207±0,798 ус.ед и 1,344±1,037 ус.ед. соответственно (Рис.1).
В результате правосторонней окклюзии средней мозговой артерии у группы животных негативного контроля наблюдалось повышение степени агрегации тромбоцитов, относительно Л/О крыс на 80,6 % (P>0,05). Скорость и показатель агрегации тромбоцитов, у данной группы животных, также были существенно выше, чем у ложнооперированных крыс. При этом скорость агрегации тромбоцитов увеличилась на 125,4 % (P>0,05), а показатель агрегации на 47,1 % (P>0,05).
Подобные изменения в состоянии антитромбогенного потенциала сосудистого эндотелия, вероятно, могут быть связаны, с развитием в условиях ИГМ эндотелиальной дисфункции, сопровождаемой повышенной продукцией эндотелием сосудов тромбогенных факторов (эндотелин-1, тромбоксан А2, ингибитор тканевого активатора плазминогена и д. р.) и снижением образования их антагонистов (оксид азота, простациклин, тканевой активатор плазминогена и д. р.). В результате возникающий дисбаланс в системе про/антиагреганты приводит к повышению образования тромбоцитарных агрегатов.
Рис. 1. Изменение антитромботической функции эндотелия на фоне ишемии головного мозга и при применении исследуемого соединения (* — достоверно относительно ложнооперированных крыс (P>0,05), # — достоверно относительно группы животных негативного контроля (P>0,05))
Применение сулодексида способствовало снижению степени агрегации тромбоцитов, относительно группы животных негативного контроля на 44,6 % (P>0,05), в то же время данный показатель в сравнении с Л/О группой крыс увеличился лишь на 25,3 %. Аналогично изменялись значения скорости и показателя агрегации тромбоцитов на фоне введения сулодексида. При этом скорость агрегации в сравнении с НК группой животных снизилась на 32,9 % (P>0,05), а показатель агрегации уменьшился в 1,52 (P>0,05) раза и статистически значимо не отличался от значения ложнооперированных крыс. Полученные данные согласуются с ранее проведенными исследованиями и подтверждают наличие у сулодексида позитивного эндотелиотропного действия [4].
На фоне введения апигенина степень агрегации тромбоцитов относительно НК группы крыс статистически значимо снизилась на 69,6 % (P>0,05) и практически не отлилась от значения Л/О группы животных. Скорость агрегации тромбоцитов также претерпела существенные изменения. В сравнении с группой крыс негативного контроля данный показатель снизился в 2,27 (P>0,05) раза (Рис.1). В то же время относительно группы животных, получавших сулодексид, скорость агрегации тромбоцитов, при применении апигенина, уменьшилась на 71 % (P>0,05). У крыс, получавших апигенин показатель агрегации тромбоцитов составил 0,982±0,03 усл. ед, что было меньше аналогичного значения группы НК животных в 2,01 (P>0,05) раза и крыс и статистически значимо не отличался от показателя агрегации ложнооперированной группы животных. Полученные данные, по всей видимости, могут быть связаны с тем, что апигенин проявляя антиоксидантную и противовоспалительную активность, способен нивелировать процесс окислительной модификации оксида азота в пероксонитирит, нормализуя тем самым функциональную активность эндотелия сосудов с восстановлением его атитромбогенного потенциала [5].
Выводы:
- Ишемия головного мозга, смоделированная путем правосторонней окклюзии средней мозговой артерии, приводит к сбою антитромботической функции эндотелия.
- Применение апигенина позволило улучшить функциональное состояние сосудистого эндотелия и нормализовать продукцию эндотелием антиагрегантных факторов, что нашло отражение в снижении, относительно группы крыс негативного контроля, степени агрегации — на 69,6 % (P>0,05), скорости и показателя агрегации тромбоцитов — в 2,27 (P>0,05) и в 2,01 (P>0,05) соответственно. При этом фармакологический эффект от применения апигенина был сопоставим с таковым от применения препарата сравнения — сулодексида.
Литература:
- Воронков А. В., Поздняков Д. И., Мамлеев А. В. Изучение вазодилатирующей и антитромботичекой функций эндотелия мозговых сосудов на различных моделях его ишемического повреждения // Современные проблемы науки и образования. — 2015. — № 5; URL: http://www.science-education.ru/128–22406
- В. М. Черток, А. Е. Коцюба. Эндотелиальный (интимальный) механизм регуляции мозговой гемодинамики: трансформация взглядов // Тихоокеанский медицинский журнал. — 2012. — № 2. — с. 17–26.
- Гусев Е. И., Мартынов М. Ю., Камчатнов П. Р. Ишемический инсульт. Современное состояние проблемы. Доктор.Ру 2013; 5(83): 7–12.
- Изучение влияния сулодексида на эндотелий-зависимую вазодилатацию мозговых сосудов у животных со стрептозотоцин-индуцированным сахарным диабетом // Сахарный диабет, № 3, 2011. с.12–15.
- Zhang T, Su J, Guo B et al. Apigenin protects blood-brain barrier and ameliorates early brain injury by inhibiting TLR4-mediated inflammatory pathway in subarachnoid hemorrhage rats // Int Immunopharmacol. 2015 Sep; 28 (1): 79–87.
