Некоторые аспекты антиагрегантной и антикоагулянтной активности икариина в условиях экспериментальной цереброваскулярной патологии ишемического генеза



Проведено исследование, посвященное изучение антиагрегантных и антикоагулянтных свойств икариина в условиях ишемии головного мозга. В результате установлено, что икариин обладает незначительным антиагрегантным и антикоагулянтным потенциалом и уступает по активности препарату сравнения — сулодексиду.

Ключевые слова: ишемия головного мозга, антиагреганты, антикоагулянты, флавоноиды, икариин

Оптимальное ведение больных, перенесших ишемический инсульт, является важной задачей не только современной практической медицины, но и предметом многочисленных экспериментальных теоретико-прикладных исследований. Стратегии лечения ишемического инсульта предполагают наличие фармакологических (применение лекарственных препаратов) и нефармакологических подходов (физический и психологический покой, и т. д.). Среди лекарственных средств, применяемых в терапии ишемического инсульта, особое место занимают антитромбоцитарные средства и антикоагулянты [3].

Возможность применения антикоагулянтов при ишемическом инсульте имеет достаточно длительный период изучения. Несмотря на более чем 50 летнюю историю экспериментальных исследований и клинических наблюдений применения антикоагулянтов в условиях ишемически опосредованной недостаточности церебральной гемодинамики не было установлено их достаточной фармакотерапевтической эффективности [5]. Напротив, существует значительный риск при применении, так называемых «типичных» антикоагулянтов при ишемическом инсульте. В условиях ишемии головного мозга данные лекарственные препараты могут выступать как инициирующий фактор для геморрагической трансформации, что может способствовать дисфункции гематоэнцефалического барьера с развитием паренхиматозных кровоизлияний, ухудшая тем самым, состояние пациента и снижая прогноз на благоприятный исход заболевания [3]. В этой связи, некоторыми авторами, целесообразным признается направление поиска «мягких» антикоагулянтов, способных, без значительных рисков, уменьшить тромбогенный потенциал крови в условиях ишемического инсульта [4]. При этом целенаправленный поиск фармакологически активных соединений с данным видом активности ведется не только среди продуктов химического синтеза, но и среди природных объектов. Последнее направление можно считать особенно перспективным, поскольку при сопоставимой эффективности природные объекты обладают лучшим профилем безопасности, нежели синтетические соединения.

Цель исследования: оценить антиагрегантную и антикоагулянтную активность икариина в условиях экспериментально смоделированной ишемии головного мозга.

Материалы иметоды исследования: Эксперимент выполнен на 40 крысах — самцах линии Wistar массой 220–240 грамм, разделенных на 4 равные экспериментальные группы. Первая группа — являлась ложнооперированной (ЛО). Второй (группа крыс негативного контроля — НК) и последующим группам животных воспроизводили ишемию головного мозга путем необратимой правосторонней окклюзии средней мозговой артерии [1]. При этом 3-я группа крыс получала препарат сравнения — сулодексид (Вессел Дуэ Ф, Alfa Wasserman, Италия) в дозе 30 ЕВЛ (единицы высвобождения липопротеинлипазы). 4- й группе животных вводили икариин в дозе 100 мг/кг. Исследуемое соединение (икариин) и сулодексид вводили per os непосредственно после воспроизведения ишемии и на протяжении 3-х суток. По истечении указанного времени у животных производили забор крови, с дальнейшим получением сыворотки для определения показателей, характеризующих антиагрегантный и антикоагулянтный потенциал.

Степень коллаген (1 мг/мл) индуцированной агрегации тромбоцитов определяли с использованием системы двухканального лазерного анализатора агрегации АЛАТ — 2 «БИОЛА» (НПФ «БИОЛА», Россия) методом определения относительного среднего размера агрегатов. Также исследовали содержание в сыворотке крови растворимых фибрин-мономерных комплексов (РФМК, 10–² г/л), фибриногена (г/л), активность фактора фон Виллебранда (FW). Тромбиновое (ТВ) и активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ) определяли на анализаторе показателей гемостаза АПГ2–01 «МИНИЛАБ 701» хронометрическим методом. В работе использовались наборы реактивов НПО «РЕНАМ» (Россия).

Результаты опытов обрабатывали методом вариационной статистики с использованием пакета прикладных программ STATISTICA 6.0 (StatSoft, Inc., США для операционной системы Windows) и Microsoft Excel 10-й версии. Различия считали значимыми при p<0,05.

Результаты иих обсуждение: Угруппы крыс негативного контроля в условиях ишемии головного мозга отмечено повышение степени коллаген индуцированной агрегации тромбоцитов, относительно ЛО группы животных на 86,9 % (p<0,05) (табл.1). Также у НК группы крыс наблюдалось увеличение концентрации РФМК, фибриногена и активности FW по сравнению с ложнооперированными животными на 406,1 % (p<0,05), 321,2 % (p<0,05) и 67,1 % (p<0,05) соответственно. ТВ и АЧТВ у группы животных негативного контроля было ниже аналогичных значений ЛО группы крыс соответственно на 72,4 % (p<0,05) и 93,3 % (p<0,05). Полученные данные согласуются с литературными источниками [1].

Применение сулодексида в условиях ишемии головного мозга, способствовало снижению степени агрегации тромбоцитов, по сравнению с НК группой крыс на 66,3 % (p<0,05). Кроме того у животных, получавших сулодексид отмечено уменьшение (относительно группы животных негативного контроля) концентрации РФМК и фибриногена на 327,6 % (p<0,05) и 125,4 % (p<0,05) соответственно. Активность FW при применении сулодексида была ниже (на 35,6 %(p<0,05)), нежели чем у НК группы крыс. Введение сулодексида на фоне ишемии головного мозга привело к нормализации ТВ и АЧТВ, что выражается в удлинении временного интервала, относительно группы животных негативного контроля на 45,7 % (p<0,05) и 66,9 % (p<0,05) соответственно (табл.1). В совокупности, полученные экспериментальные данные согласуются с ранее проведенными исследованиями [2].

Таблица 1

Изменение параметров сосудисто-тромбоцитарного иплазменного гемостаза при ишемии головного мозга, иприменении икариина

Показатель/группа	ЛО	НК	сулодексид	икариин
Степень агрегации, усл. ед.	1,461±0,061	2,73±0,223*	1,642±0,122#	2,516±0,181
АЧТВ, сек	31,5±0,728	16±3,743*	26,7±1,016#	20,1±0,659#
ТВ, сек	20±1,42	11,6±1,373*	16,9±0,954#	11,4±0,648
РФМК, 10–2 г/л	4,9±0,187	24,8±1,2*	5,8±0,255#	15,8±3,262#
Фибриноген, г/л	1,37±0,064	5,77±0,24*	2,56±0,282#	5,06±0,348
FW, %	78,4±2,249	131±0,837*	96,6±2,015#	125,4±3,01#

Примечание: * — статистически значимо, относительно ЛО группы животных (p<0,05); # — статистически значимо, относительно НК группы крыс (p<0,05)

На фоне введения икариина концентрация РФМК, по сравнению с НК группой крыс, уменьшилась на 60 % (p<0,05) (табл.1). Также при применении икариина отмечено снижение активности FW (относительно группы животных негативного контроля) на 4,5 % (p<0,05) и удлинение АЧТВ на 25,6 % (p<0,05). Остальные изучаемые параметры существенных изменений не претерпели. Подобные изменения, вероятно, связаны с антиоксидантной активностью икариина [6], как соединения флавоноидной структуры, и опосредованным улучшением эндотелиальной функции, с восстановлением тромборезистентных свойств сосудистого эндотелия [1].

Выводы:

1. Ишемия головного мозга, опосредованная необратимой окклюзией средней мозговой артерии, способствует повышению тромбогенности крови, что выражается в повышении степени агрегации тромбоцитов (на 86,9 % (p<0,05)), увеличении концентрации РФМК, фибриногена, активности фактора Виллебранда соответственно на 406,1 % (p<0,05), 321,2 % (p<0,05) и 67,1 % (p<0,05), снижении тромбинового времени и активированного частичного тромбопластинового времени (на 72,4 % (p<0,05) и 93,3 % (p<0,05)).
2. Применение сулодексида в условиях ишемии головного мозга способствовало нормализации всех изучаемых параметров, характеризующих, как сосудисто-тромбоцитарный, так и плазменный гемостаз.
3. Введение икариина способствовало незначительному снижению тромбогенного потенциала крови, что выразилось в уменьшении концентрации РФМК, активности FW, а также увеличении АЧТВ. Таким образом, в результате проведенного исследования, установлено, что икариин обладает незначительной антиагрегантной и антикоагулянтной активности на фоне экспериментальной цереброваскулярной патологии ишемического генеза и уступает по данному виду активности препарату сравнения — сулодексиду.

Литература:

1. Воронков А. В., Поздняков Д. И., Мамлеев А. В. Сравнительная оценка влияния ATACL, мексидола и тиоктовой кислоты на антитромботическую функцию эндотелия и некоторые показатели состава периферической крови экспериментальных животных на фоне фокальной ишемии головного мозга // Современные проблемы науки и образования. 2016. № 2. URL: http://www.science-education.ru/ru/article/view?id=24398 (дата обращения: 28.11.2016).
2. Тюренков И. Н., Воронков А. В., Слиецанс А. А. и др. Влияние флавоноидов на основные параметры гемостаза крови и антитромботическую функцию эндотелия при сахарном диабете // Фармация. 2012. № 4.С. 34–36.
3. Ciccone A., Valvassori L., Nichelatti M., et al. Endovascular Treatment for Acute Ischemic Stroke // N Engl J Med. –2013. – № 368(10). – Р. 904–913.
4. Kazmi R. S., Lwaleed B. A. New anticoagulants: how to deal with treatment failure and bleeding complications //British Journal of Clinical Pharmacology. – 2011. – № 72(4). – Р. 593–603.
5. Kazmierski R., Michalak S., Wencel-Warot A., Nowinski W. L. Serum tight-junction proteins predict hemorrhagic transformation in ischemic stroke patients // Neurology. –2012. – № 79(16). – Р. 1677–1685.
6. Millikan C. H., Siekert R. G., Shick R. M. Studies in cerebrovascular disease. III. The use of anticoagulant drugs in the treatment of insufficiency or thrombosis within the basilar arterial system // Proc Staff Meet Mayo Clin. – 1955. – № 30(6). – Р. 116–126.
7. Xiong W., Chen Y., Wang Y., Liu J. Roles of the antioxidant properties of icariin and its phosphorylated derivative in the protection against duck virus hepatitis // BMC Veterinary Research. — 2014. – № 10. – Р. 226.